百歐博偉生物：植物組織培養(yǎng)技術(shù),，尤其是快速繁殖,，并非只有專業(yè)人員和專業(yè)實驗室才能夠完成的,。作為對多肉植物和組織培養(yǎng)有著濃厚興趣的愛好者,，在充分利用家庭條件的基礎上,，同樣可以制備出自己的試管苗來的,。在我們進行多肉植物的栽培中認識到,，一些比較名貴的園藝品種，比如：萬象,、玉扇,、壽、高紋鷹爪等十二卷屬品種,，還是繽紛橄欖,、何魯牽牛等塊莖類植物，甚至于星球?qū)?、巖牡丹屬等等,，這些植物的常規(guī)繁殖系數(shù)很低，他們都可以采用組織培養(yǎng)來解決其繁殖問題,，并且可以得到相當數(shù)量的幼苗,。對于奇想天外等種子萌發(fā)困難的植物，同樣可以借助組織培養(yǎng)來進行無菌播種,。在進行組織培養(yǎng)過程中,，不但可以對培養(yǎng)的植物有更深一層的認識，對常規(guī)的栽培有著相當大的意義,。許多搞組織培養(yǎng)的專家,，最初都不是專業(yè)學組培的，就是憑著興趣和探索精神取得輝煌成績的,。關(guān)鍵是,，愛好者有著濃厚的興趣，非凡的觀察力和細致入微的操作,，這些都可以彌補非專業(yè)的缺陷,，并且可以充分利用日常生活中的各種可利用資源,，這些就足以讓愛好者在家庭環(huán)境下完成組織培養(yǎng)了。同時這也不僅僅滿足了自己的興趣,，還可以有一定的經(jīng)濟收益,，甚至可以有所創(chuàng)新和發(fā)明。

一,、如何解決場地和基本設備

進行組織培養(yǎng),，沒有一定的設備是無法開展的。正規(guī)實驗室的組織培養(yǎng)設備是昂貴的,，不適合家庭消費,，但如果能有途徑買到廉價的實驗室設備，那就在好不過了,。如果沒有辦法搞到實驗室設備,，就不妨動手自己制作一些簡單的設備。

1,、無菌操作的主要設備——接種箱和壓力鍋：

接種箱：植物組織培養(yǎng)的主題操作需要在一個相對密閉的無菌環(huán)境中進行,。那么說我們首先要創(chuàng)造一個密閉的環(huán)境，可以利用一些木料,、塑料板,、有機玻璃、鋁合金骨架等等廉價的材料,，動手粘合一個小巧的接種箱,。具體的參數(shù)可以找一本“食用菌栽培”的書籍，模仿種蘑菇的接種箱做一個即可,。需要注意的是,，組織培養(yǎng)的接種箱的密閉性要求比較高，盡量避免腐朽的木材和易生銹的材料,，箱子的頂端按放兩盞燈：20w的紫外線燈和20w的日光燈,。箱體的周邊盡量采用玻璃材料，因為這樣便于觀察,，有時候接種箱還可以借用為培養(yǎng)箱,，周邊采用玻璃材料更方便于觀察和培養(yǎng)。

高壓鍋：主要用來對培養(yǎng)基和其他材料的滅菌,。在實驗室通常使用醫(yī)用高壓滅菌器,，然而在家庭要充分利用廚房使用的高壓鍋，高壓鍋的壓力要低于滅菌器,，但是適當延長滅菌時間，還是可以取得較好的效果的,。比如：對培養(yǎng)基滅菌40分鐘就基本上可以達到滅菌效果（滅菌器是20分鐘）,；無菌水采用間歇滅菌法，先用高壓鍋壓40分鐘，放置24小時,，再壓20分鐘即可達到效果,。

2、場地：

這個就因人而易了,，總體的要求就是進行組織培養(yǎng)操作的地方要盡量無塵,，減少空氣流動，有一定的陽光,。比如書房,、寫字間都可以用來進行無菌操作。

進行培養(yǎng)基的配制可以借用一下廚房,，但所使用的器具必須和廚具分開,。一般說，組織培養(yǎng)中的幾乎全部化學物質(zhì)對人體是無害的,，除了少數(shù)激素類物質(zhì)和滅菌劑,。對于有毒害的物質(zhì)，需要認真保管,，以免發(fā)生危險,。

3、輔助設備：

主要指冰箱,，它是用來儲存化學物質(zhì)和培養(yǎng)基的,。天平，可以采用感量在100克的托盤天平,，甚至用中藥的藥衡都可以代替,。培養(yǎng)架，這個就更簡單了,，采用鋁合金-玻璃的培養(yǎng)箱既可以滿足要求,，如果日光不足，可配合日光燈補光等,。

4,、化學試劑：

化學試劑是的，因為組織培養(yǎng)的核心就是培養(yǎng)基的成分,，而并不是簡單的無菌操作,。一些用量較大的化學物質(zhì)是有必要買的，比如大量元素白砂糖,、瓊脂等等,。微量元素和有機復合物不需要購買，因為它們的用量很小,，我們可以用蔬菜浸汁或者馬鈴薯浸汁來代替,。激素是的,，他們的稱量需要借助分析天平，但這是家庭條件所不允許的,，如果有條件可以借助關(guān)系單位代替配成母液,，每次取一些使用即可。辦法是到農(nóng)資商店（賣農(nóng)藥化肥的地方）,，它們一般出售農(nóng)業(yè)用的激素,，有的是用安瓿裝的，按照一定的比例加入到培養(yǎng)基當中即可,。近幾年來,，有些化學品公司開始生產(chǎn)植物組織培養(yǎng)基原粉，只需要稱取一定量加水即可,，很方便,。比如泛生化學品公司生產(chǎn)的ms原粉，只需要稱量40克,，加1升水,，用微波爐加熱5分鐘即可分裝，相當簡便,。

消毒劑通常采用,，如果不容易搞到，可以用漂白粉代替,。調(diào)節(jié)酸堿度時,，可以采用家庭常用的純堿和白醋。

5,、培養(yǎng)容器和玻璃儀器：

組織培養(yǎng)的容器要求并不高,，只要玻璃顏色為透明色即可（鈉玻璃不可以）。

我們可以到垃圾站去看看,，撿回一些廢舊的果醬瓶就可以了,。比較好用的是阿香婆辣醬瓶，我們實驗室也是采用的這種瓶子,。瓶子的封口膜采用聚丙烯塑料即可,，如果不好找到，可以采用微波爐專用的錫箔紙甚至方便面的袋子,，折疊成雙層,，用橡皮圈固定即可。

其它玻璃儀器,，比如燒杯,、玻璃棒都可以用家庭的杯子和筷子代替；一些度量儀器,，如量筒和移液管到玻璃儀器商店購買,，恐怕花不了20元錢就可以配置一套相當棒的組培玻璃儀器,。

6、其它：

還有一些用品是必需的,。比如精密ph試紙（5.4~7.0），需要買一本,，大約花1.5元即可搞定,；酒精燈也不需要買，用墨水瓶配上一個玻璃環(huán),，再加上一個棉花芯,，最后用農(nóng)夫山泉礦泉水的瓶蓋做燈冒，這樣的酒精燈很小巧,，適合接種箱使用,。刀子剪子鑷子是必需的，到花市的工具攤位上,，花10元錢全部搞定,，注意選比較小巧的工具。

關(guān)于用水,，按理說應該使用蒸餾水,，但是我們家庭飲用的純凈水比蒸餾水還要純，那么說借用一些飲用水就可以了,。我們曾經(jīng)采用康師傅純凈水進行動物細胞的培養(yǎng),，效果都是很不錯的，更何況于植物細胞培養(yǎng)了,。

以上是組織培養(yǎng)的基本設備和試劑,，主要突出了他們相關(guān)的替代品，因為作為組織培養(yǎng)中的快速繁殖,，它的要求是相當?shù)偷?。我們的家庭培養(yǎng)和工廠化是不同的，工廠化生產(chǎn)組培苗要追求高增殖率,，所以它的要求就比較精細和標準,。我們的家庭培養(yǎng)則不需要那么準確，只要達到培養(yǎng)成功的目的即可,。當然,，如果想提高增殖倍率和試管苗的品質(zhì)，必須盡量貼近實驗室的用具和器材,，代用品總是有一定的缺陷的,。

二、進行組織培養(yǎng)前的準備

1,、培養(yǎng)容器和玻璃儀器的準備：

進行培養(yǎng)基的配制首先要準備好培養(yǎng)瓶和配制使用的玻璃儀器,。培養(yǎng)瓶一般使用各種果醬瓶,，要先用洗潔精浸泡瓶子4~8小時，再用流水沖洗數(shù)次,。其他的玻璃儀器同樣需要這樣清潔,，直到玻璃壁上不掛水珠而是成為水膜為止。清洗完畢的玻璃容器要倒扣,，空去瓶內(nèi)的水,。

清洗干凈的容器要注意防塵，盡量放置在玻璃柜中,。更簡單的是用干凈的毛巾將容器蓋住,。

移液管要用吸球來清洗，反復用蒸餾水吹吸直到潔凈為止,，將移液管放置在一個長筒中,，便于使用。一般移液管只能使用一次,，即要清洗,，所以有多必要準備幾只移液管，建議：10ml/2支,，5ml/2支,，1ml/5支。

2,、培養(yǎng)基的配制：

經(jīng)典的組織培養(yǎng)用培養(yǎng)基是ms配方,，其基本上劃分為：大量元素、微量元素,、鐵鹽,、有機復合物、植物激素,、糖和支持物,。這些成分的用量都在毫克級，用普通天平是難以稱量的,，為了解決這個問題,，我們可以按比例放大各成分的用量配制成母液，使用的時候按一定比例加入即可,。

下面我將一種ms培養(yǎng)基的母液配制方案公布如下：

大量元素：66.0克,；

硝酸鉀76.0克；

無水氯化鈣13.3克,；

七水硫酸鎂14.8克,；

磷酸二氫鉀6.8克。

以上分別溶解后合并定容到1升，每配制1升標準ms培養(yǎng)基取25毫升,。

鐵鹽：七水硫酸亞鐵5.56克,；

乙二胺四乙酸二鈉（edtana）7.46克。

以上兩種分別加熱溶解,，混合,，定容到1升，調(diào)整ph到5.5以下,，每配制一升ms取5毫升,。

微量元素和有機復合物的用量過于微小，為了簡便我們可以用蔬菜提取液或者馬鈴薯提取液代替,。通常我們習慣用100克菠菜加100ml的水煮沸10分鐘，過濾留濾液,，每配制1升ms培養(yǎng)基加入20~50毫升提取液,。同樣也可以使用帶皮馬鈴薯100克加200毫升水煮沸15分鐘，過濾留濾液,，每升ms加入50~100毫升即可,。

加入上述各組分后，每升ms培養(yǎng)基還需要加入白砂糖30克,，瓊脂7克,。這里要說明的是，糖和瓊脂都是可變的量,，要根據(jù)需要調(diào)整,。另外制作果凍用的卡拉膠也可以代替瓊脂，透明度更好,。

上述各成分加入后,，定容到800毫升左右，用微波爐加熱,，直到瓊脂全部溶解為止,。此時加入所需的植物激素（通常配制成0.1%溶液，這樣每取1毫升,，換算到培養(yǎng)基中就是1ppm）,。然后加水定容到1100毫升（1.1升），之所以多出0.1升是為了抵消分裝和消毒中的損耗,。最后用酸堿調(diào)整ph到5.8~6.0,。

3、使用ms原粉配制培養(yǎng)基：

目前國內(nèi)的一些化學品公司開發(fā)了簡便的ms培養(yǎng)基原粉,，大大簡便了培養(yǎng)基的配制,，根據(jù)不同公司的說明選擇培養(yǎng)基的種類。下面就以泛生化學品公司的ms原粉為例：泛生化學品公司生產(chǎn)的ms培養(yǎng)基原粉,，包括了大量元素,、微量元素,、鐵鹽、有機復合物,、糖和支持物,，他們的支持物是一種人工合成的半乳糖硫酸脂——polygal，這種物質(zhì)作為支持物雖然提高了成本,，但是無論是透明度還是強度都優(yōu)于瓊脂,，更重要的是ploygal對組織的褐變有一定的抑制作用，對初學者尤為重要,。一般稱取ms原粉40克,，加水800毫升，微波爐加熱溶解,，加入激素,，定容到1100毫升（1.1升），調(diào)整ph值到5.8~6.0,。

值得指出的是polygal還有一個特點,，他對ph和滅菌時間的敏感性很強，如果培養(yǎng)基配制和滅菌出現(xiàn)問題,，他會變色來提醒實驗者培養(yǎng)基出現(xiàn)問題,，這個也對初學者有一定的幫助。泛生公司也提供純品polygal 供研究使用,。

泛生公司的ms原粉價格大約是50元1000克,，能制備20升ms培養(yǎng)基。這對于家庭做組培的愛好者來說,，花50元錢可以使用一兩年,。

4、分裝：

將配制好的培養(yǎng)基分裝在培養(yǎng)容器中,，注意要趁熱分裝,，因為瓊脂在40度以下就會凝固。每個培養(yǎng)瓶裝培養(yǎng)基大約是瓶容積的1/6~1/5,，注意不要將培養(yǎng)基掛在瓶的外壁,，這樣容易造成污染。分裝后用聚丙烯薄膜或著方便面的袋子封口,，用膠圈固定（膠圈盡量選擇自行車的內(nèi)胎,，這種膠圈比較耐熱）。

5,、滅菌：

采用家庭壓力鍋消毒,，建議到醫(yī)療器械用品商店買一些“滅菌效果試紙”，它們可以指示滅菌效果，當滅菌達到效果時會變色,。把試紙和培養(yǎng)基同時放入鍋內(nèi),，加熱到有大量蒸汽冒出，再加上壓力伐,，維持小火30~40分鐘,。

滅菌完畢后自然冷卻，將培養(yǎng)基取出,，放在陰涼無塵處備用,。

6、接種箱的準備：

新制作的接種箱必須要清潔干凈,，盡量做到,。每次使用前2小時，將操作所需要的全部物品放入接種箱,，再用一個小燒杯加入3~5克高錳酸鉀放入接種箱內(nèi),，在箱內(nèi)向燒杯中倒入2~3毫升的甲醛溶液，大約幾秒鐘后會看到甲醛蒸汽出現(xiàn),，這樣可以對接種箱內(nèi)的所有物品進行初次消毒；同時打開紫外線燈照射,。紫外線燈是高電壓穿激汞蒸汽產(chǎn)生的,，紫外線進行第二道滅菌，在紫外線照射大約15分鐘后,，會激發(fā)氧氣形成臭氧,，臭氧作為第三道滅菌防線，這樣經(jīng)過三次滅菌,，接種箱基本上可以達到無菌標準,。

在操作前15分鐘內(nèi)，向剛才蒸發(fā)甲醛用的燒杯中倒入5毫升濃氨水,，因為甲醛對人體有毒害作用,，氨水可以和甲醛形成一種叫做“六亞甲基四胺”的固體物質(zhì)，從而中和了甲醛的刺激性蒸汽,。這個時候紫外燈不要關(guān)掉,，要繼續(xù)照射，直到操作前5分鐘關(guān)閉,，維持黑暗5分鐘,，然后再打開日光燈進行操作。維持5分鐘黑暗的原因是,，紫外光對微生物的殺滅是作用于dna的胸腺嘧啶,，形成四聚體，但是微生物具有一種光復活蛋白，可以在有可見光的環(huán)境下還原胸腺四聚體,，而使微生物復活,，這個作用叫做“光復活作用”，所以在關(guān)掉紫外燈后必須維持黑暗幾分鐘,，避免光復活作用的出現(xiàn),。

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