M-1 小鼠腎集合管細胞(SV40轉化)/STR鑒定

細胞介紹

該細胞源于tg(SV40E)Bri7轉基因小鼠的正常腎組織，含SV40病毒的DNA序列,，保留了皮質集合管的某些特性,，如形態(tài)和CCD（皮質結合管）抗原。大多M-1細胞的克隆具有皮質集合管中閏細胞或主細胞的特征,；5%~10%的細胞有閏細胞和主細胞的雙重表型,。當該細胞在滲透性支持物上生長時，可形成具有負跨膜電位差的腔樣結構,。

細胞特性

1） 來源：小鼠 腎

2） 形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運輸,，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們聯系。

（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,，收到后按照細胞接收后的處理方法操作,。

細胞接收后的處理

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,，若發(fā)現培養(yǎng)瓶破損,、有液溢出及細胞有污染,，請拍照后及時聯系我們,。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×,，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收,，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完quan培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),。若細胞生長密度達70%-80%以上,，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收,。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完quan培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 ,。

M-1 小鼠腎集合管細胞(SV40轉化)/STR鑒定

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

1） 準備DMEM/F-12（推薦iCell-0005）培養(yǎng)基 添加：0.005mM地塞米song,；優(yōu)質胎牛血清，5%,；雙抗,，1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現用現配。

二．細胞處理：

1） 凍存細胞的復蘇：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入到含4-6mL完quan培養(yǎng)基的離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液,，完quan培養(yǎng)基重懸細胞,。然后將細胞懸液加入含6-8ml完quan培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白mei-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL,，T75瓶2-3mL）,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化直至細胞層分散（通常在 5 至 15 分鐘內）以使培養(yǎng)基達到正常 pH 值（7.0 至 7.6），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，為避免結塊,，在等待細胞分離時請勿敲擊或搖動燒瓶來攪動細胞。難以分離的細胞可置于37°C以利于分散,。若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化,。

3.輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心3-5min,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中,，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行,。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用,。

下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,，可使用血球計數板計數,，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,，去掉上清,。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,，標注好名稱,、代數、日期等信息,。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存,。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用,。