支原體肉湯培養(yǎng)基的實驗方法與操作步驟,！

支原體肉湯培養(yǎng)基的實驗方法與操作步驟,！

一、基本信息

平臺編號：bio-55787

規(guī)格：250g

英文名稱：Mycoplasma Broth Medium

名稱：支原體肉湯培養(yǎng)基

用途：用于培養(yǎng)支原體的基礎(chǔ)培養(yǎng)基

注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療,，非藥用，非食用

二,、成分（g/L）

豬胃消化物 10.0

牛肉浸粉 5.0

酵母浸粉 5.0

氯化鈉 2.5

葡萄糖 5.0

酚紅 0.02

pH值7.6±0.2 25℃

三,、用法

稱取本品 27.52g,加熱溶解于 800ml  蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鐘,冷至室溫,無菌操作加入 滅活小牛血清或馬血清 200ml 和 80 萬單位,混勻,分裝無菌試管,備用。

四,、操作步驟

1,、準(zhǔn)確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基,，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈,。

2、校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi),，標(biāo)記劃線,，加熱溶解，補充水分,，測定酸堿度,，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi),。

3,、過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明,。

4、分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL,；三角瓶中裝100～150ml）,，塞好棉塞用牛皮紙包扎好,，準(zhǔn)備滅菌。

5,、滅菌：培養(yǎng)基的滅菌,，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死,，但細(xì)菌的芽胞有較強的抗熱性,，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達(dá)到滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,，即壓力越大,，蒸汽溫度就越高。因此,，在同一溫度條件下,，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,，菌體吸收水分后,，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強,，殺菌效果好,。

五、實驗方法

1,、產(chǎn)品名稱培養(yǎng)基陽性組：取稀釋后的各試驗菌懸液1ml分別加于預(yù)先制備的試管培養(yǎng)基中,，每種細(xì)菌接種兩支試管,。同時分別取1ml菌懸液加于無菌空平皿中,，用于計數(shù),，每種細(xì)菌做兩個平板。

2,、培養(yǎng)基陰性組：即空白對照,，即不添加菌液,。

3,、接種量計數(shù)：步驟1中的平皿中，細(xì)菌傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基,，霉菌和白色念珠菌傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基,。同時每種培養(yǎng)基做1個空白。

4,、培養(yǎng)條件：

無菌檢查：20～25℃培養(yǎng)14天或直至出現(xiàn)渾濁（不超過14天）

MPN計數(shù)：30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天

控制菌檢查：30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24小時

傾注計數(shù)用的的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板置30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天

傾注計數(shù)用的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板置20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5天

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