三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI）的檢驗原理與應(yīng)用！

一,、背景

三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基（TSI）用于鑒別腸道菌發(fā)酵蔗糖,、乳糖、葡萄糖及產(chǎn)生硫化氫的生化反應(yīng),。胨和牛肉浸出粉提供氮源,、碳源和維生素;乳糖、葡萄糖,、蔗糖為可發(fā)酵糖類,，其產(chǎn)酸時通過酚磺肽指示劑測出，酸性呈黃色,，堿性呈紅色;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫,，與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

二、檢驗原理

蛋白胨,、牛肉浸粉提供氮源,、維生素,、礦物質(zhì)；乳糖,、葡萄糖,、蔗糖為可發(fā)酵糖類，其產(chǎn)酸時通過酚紅指示劑測出,，酸性呈黃色,，堿性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫,，與硫酸亞鐵中的鐵鹽生成黑色硫化鐵,；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑,。

用法：

稱取本品64.5g,加熱溶解于1000ml蒸餾水中,加熱煮沸1分鐘,分裝于16mm×150mm試管,121℃高壓滅菌15分鐘制成高層斜面,。

三、應(yīng)用

用于雞白痢沙門氏桿菌的分離鑒定及滅活菌苗的研制：

在把從疫源地分離鑒定的雞白痢沙門氏桿菌強毒株研制成油乳劑滅活菌苗和蜂膠滅活菌苗以預(yù)防雞白痢沙門氏桿菌病,。

從白痢的發(fā)病雞只及雞白痢全血平板凝集呈陽性的淘汰蛋雞共191只雞中,檢測到80只雞罹患雞白痢,在其體內(nèi)分離到雞白痢沙門氏桿菌21株,分離株在S·S瓊脂平板上呈園形,、邊緣整齊、稍隆起,、表面濕潤,、光滑、透明的露珠狀細小菌落,鏡檢為革蘭氏陰性（G-）,、兩端鈍園,、中等大小、散在排列的桿菌,三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)上層呈黃色,不利用乳糖,、蔗糖,能產(chǎn)生硫化氫,具有賴氨酸脫羧酶和鳥氨酸脫羧酶,發(fā)酵糖類時均產(chǎn)生氣體,與沙門氏桿菌屬0多價（A-F）診斷血清反應(yīng)發(fā)生凝集,與單因子血清01,、09、012均呈現(xiàn)凝集,與單因子血清Ha,、Hb,、Hc、Hd和He均無凝集現(xiàn)象,。

證明這21株是雞白痢沙門氏桿菌,從中篩選出SR96-1,、SC14-H、SC18-L3株強毒株,三強毒株攻毒雛雞,12h后有95%的雞發(fā)病,表現(xiàn)精神萎糜,畏寒,拉稀,糞便呈白色石膏樣粘附于周圍,32-48h可見死亡,剖解,肝臟嚴重壞死,肺臟嚴重出血,盲腸水腫,同時回收到分離株,攻毒二月齡育成雞和成年雞6天后剖殺,可見肝表面有針尖大小,、數(shù)量不一的壞死灶,膽囊腫大,脾腫大,心包膜增厚,心包液增多,心外膜發(fā)炎或心肌壞死灶等變化,尤以肝病變?yōu)樽睢?/p>

三強毒株和標準株對雛雞的半數(shù)致死量LD50分別是SR96-1LD50=2.04×104個/只;SC14-HLD50=4.43×104個/只;SC18-LLD50=1.38×104個/只;標準株C79-13-4LD50=1.39×104個/只,對2月齡育成雞,、成年雞的半數(shù)感染量ID50分別是1.197×108、1.897×108;雞白痢沙門氏桿菌標準株每ml含菌量是6.145×109個菌/ml,。表明分離菌株的毒力強于或相當于標準株,具有地方代表性,可做菌苗候選株,。

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