膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)的原理與應(yīng)用及使用方法,！

一、背景

膽鹽乳糖培養(yǎng)基(BL)用途：用于藥品和生物制品中大腸桿菌，沙門氏菌和綠膿桿菌的增菌培養(yǎng)。

二、原理

胨提供碳氮源,；乳糖是可發(fā)酵的糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓,；磷酸氫二鈉為緩沖劑,；牛膽鹽和去氧膽酸鈉為選擇性抑菌劑。

成分(g/L)：蛋白胨20.0,；乳糖5.0,；牛膽鹽2.0；氯化鈉5.0,；磷酸氫二鉀4.0,；

pH值7.4±0.2 25℃

三、使用方法

1,、稱取本品35.8g,，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解,，分裝三角瓶,，每瓶100mL，121℃20min，待冷至常溫后,，備用,。

2、樣品的處理,。

3,、取膽鹽乳糖增菌液3份,，2份分別加入規(guī)定量的供試液,，其中一份加入對照菌50～100個(gè)作陽性對照，第三份加入與供試液等量的稀釋液作陰性對照,。

4,、將三角瓶放入30～35℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24h。必要時(shí)可延長至48h,。

5,、觀察結(jié)果。陽性對照應(yīng)生長良好,，陰性對照應(yīng)無菌生長,。

四、應(yīng)用

用于乳品中大腸菌群快速檢測研究：

以國標(biāo)法中乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為基本營養(yǎng)成分,，分別研究構(gòu)建了檢測片法和細(xì)胞培養(yǎng)瓶劑法,并對模擬條件下的可逆性損傷大腸桿菌進(jìn)行了復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)研究,。為探索適合乳品中大腸菌群快速檢測的方法和提高檢出率打下研究基礎(chǔ)。

1,、建立了乳品中大腸菌群檢測片快速檢測方法,，以國標(biāo)法中的乳糖發(fā)酵管培養(yǎng)基為基本營養(yǎng)成分，遴選,、優(yōu)化,、添加輔助營養(yǎng)成分、酸堿指示劑,、顯色劑,、緩沖劑、修復(fù)劑,、選擇性抑菌劑,，通過冷水凝膠劑等均勻固化于基片上。樣品滴加檢測片上,，培養(yǎng)16～18 h即可直接依據(jù)檢測片顏色的變化定量檢樣中大腸菌群的含量,，結(jié)果既可用cfu/mL報(bào)告，也可以MPN形式報(bào)告,。

優(yōu)化后的(a)鮮乳檢測片配方(g.L-1)：胰蛋白胨10.0,大豆蛋白胨5.0,乳糖15.0,SDS 0.1,磷酸氫二鉀4.0,氯化鈉3.0,聚丙烯酸鈉1.0,質(zhì)量濃度為2%的TTC溶液5 mL,質(zhì)量濃度為1.6g/100mL溴甲酚紫溶液4 mL,蒸餾水1000 mL,；(b)酸乳檢測片配方(g.L-1)：胰蛋白胨10.0,大豆蛋白胨5.0,乳糖15.0,SDS 0.1,磷酸氫二鉀20.0,氯化鈉3.0,聚丙烯酸鈉1.0,質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%的TTC溶液5 mL,質(zhì)量濃度為1.6 g/100mL溴甲酚紫溶液4 mL,蒸餾水1000 mL。

檢測片對標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌等7株菌株和市售乳制品樣本進(jìn)行測試，結(jié)果表明,，檢測片上的紅色菌落清晰明顯,，菌落周圍黃暈顏色深淺適宜，檢測結(jié)果重復(fù)性強(qiáng),，靈敏度高,，檢出限為0～4cfu/mL,報(bào)告結(jié)果可在18 h內(nèi)完成。

實(shí)際使用檢測片法和國標(biāo)法對鮮乳,、酸乳,、奶粉各20份樣本進(jìn)行大腸菌群檢測，兩方法所測結(jié)果的總符合率為96.7%,檢測結(jié)果經(jīng)χ2檢驗(yàn),χ2=0.5<χ20.05(1),P>0.05,表明兩方法檢出的陽性率在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異,。

2,、研究了一種用于快速檢測大腸菌群的細(xì)胞培養(yǎng)瓶劑法，即以國標(biāo)法中的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基為營養(yǎng)成分,，經(jīng)濃縮,、干燥后制成快速檢測瓶劑，以遴選的3.5 mol/LNaOH配制的百里香酚酞溶液作為產(chǎn)氣指示劑,，并將其制成1×1cm規(guī)格產(chǎn)氣指示試紙,。

樣品滴加細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)，培養(yǎng)24 h,依據(jù)培養(yǎng)瓶蓋上產(chǎn)氣指示試紙顏色變化及瓶內(nèi)溶液顏色變化,，確定可疑陽性樣品,，并對其進(jìn)行氧化酶實(shí)驗(yàn)及鏡檢，驗(yàn)證大腸菌群的存在性,。

實(shí)驗(yàn)對細(xì)胞培養(yǎng)瓶法進(jìn)行了大腸菌群的重復(fù)性及實(shí)際樣品檢測,，并與國標(biāo)法進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示,，細(xì)胞培養(yǎng)瓶法與國標(biāo)法所測結(jié)果符合率達(dá)96%,樣品檢測報(bào)告時(shí)間只需24 h,兩種方法所測結(jié)果在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著性差異(P>0.05),。

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