C2C12 小鼠成肌細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

這是D. Yaffe 和 O. Saxel建立的小鼠成肌細胞株的亞克隆(由H. Blau等人構(gòu)建),。C2C12細胞株分化很快，形成可伸縮的肌管并生成特征性的肌蛋白,。用骨形成蛋白2(BMP-2)處理，導(dǎo)致分化途徑從成肌細胞轉(zhuǎn)換成成骨細胞,。檢測表明肢骨發(fā)育畸形病毒(鼠痘)陰性,。

細胞特性

1） 來源：組織： 肌肉  品系：C3H  細胞類型： 成肌細胞

2） 形態(tài)：成肌細胞

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

（3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

細胞用途：僅供科研使用。

細胞接受后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml新的*培養(yǎng)基,。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系,。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yǎng)基,；胎牛血清，10%,；雙抗,，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。

二． C2C12 小鼠成肌細胞/鏡像綺點（iCell）處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度,。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1：2的比例分到新的含6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，建議凍存一支備用，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2到1:5的比例進行,。

3） 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。

下面T25瓶為類,；

1，細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后,，加入1ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。

2,，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%,，細胞密度1-2xE6/ml,，每支凍存管凍存1ml細胞懸液，注意凍存管做好標識,。

3,，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一,、原代細胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實驗外包服務(wù)

        二,、細胞系服務(wù)：
               細胞株/系培養(yǎng),、增殖、凍存和相關(guān)說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導(dǎo)
               細胞系培養(yǎng)基,、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子、試劑等

        三,、iPS細胞服務(wù)：
               iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四,、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等

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