很多科研小伙伴在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中,，總是出現(xiàn)各種各樣的情況和問題,，比如,，細(xì)胞漏液,、不貼壁、細(xì)胞有黑點,、支原體污染,、不增殖、細(xì)胞老化變形,、復(fù)蘇存活率低等等,，這些問題對于參與細(xì)胞實驗的小伙伴來說，是急需解決的大問題,，好不容易買來的細(xì)胞,，剛剛進(jìn)行培養(yǎng)傳代，就出現(xiàn)了以上的各種問題,，這樣的情況通常都會令小伙伴們無比抓狂,。

因為想要開展后續(xù)實驗，培養(yǎng)細(xì)胞往往是關(guān)鍵要事,，細(xì)胞養(yǎng)不好,，后續(xù)實驗就無法進(jìn)行。

如果排除了其他試劑選擇不當(dāng),、細(xì)胞株老化,、復(fù)蘇存活率低等原因，而仍有上述一種或幾種情況,，那么還有一種情況發(fā)生,，那就是你的細(xì)胞可能被污染了。所以不管發(fā)生哪種類型的污染情況都會造成相同的結(jié)果,，就是實驗需要重新做,，這樣不僅增加了實驗成本，而且又浪費工作時間,，還增加了實驗的重復(fù)性,。

而且以污染細(xì)胞和未污染細(xì)胞為基礎(chǔ)進(jìn)行實驗時,，有可能得到的實驗結(jié)果*不同。更為嚴(yán)重的是,，如果你所研究的細(xì)胞是另外一種細(xì)胞的話,，那所做的所有工作可能會一文不值。

那么為什么一定要進(jìn)行支原體污染清除呢,？

支原體污染清除要求

從2013年開始,，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測,。以細(xì)胞為載體的科學(xué)研究,，如果不能保證所用的細(xì)胞無支原體污染，則實驗結(jié)果很可能是不可靠甚至是*錯誤的,！

支原體直徑約為0.1-0.3 μm,，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0.22-0.45 μm）,，因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除,，常用的抗生素也對支原體無效。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個世界性問題,，世界各國細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%,。

支原體可通過細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔,、皮膚造成污染,，或者血清等添加物而帶入污染。

電鏡下的支原體

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見,，一般不會引起培養(yǎng)物混濁,，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸,，影響細(xì)胞生長速率,，促進(jìn)代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài),，影響 DNA,、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá),，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜,，誘導(dǎo)染色體畸變。

支原體的危害

支原體清除服務(wù)包括以下幾個方面：

服務(wù)對象

1. 實驗室的種子細(xì)胞,，如從ATCC,、JCRB、DMSZ等國外專業(yè)細(xì)胞庫采購的珍貴細(xì)胞系；

2. 組織珍貴的原代細(xì)胞,；

3. 需要進(jìn)行基因編輯的細(xì)胞,；

4. 各類干細(xì)胞（含iPS細(xì)胞）；

5. 稀有細(xì)胞,。

服務(wù)內(nèi)容

1.根據(jù)客戶提供的細(xì)胞名稱,、細(xì)胞代次、細(xì)胞類型制定細(xì)胞的支原體清除方案,；

2. 細(xì)胞STR鑒定（選做）,；

3. 支原體PCR法檢測支原體污染程度；

4. 細(xì)胞的支原體清除,，一般污染單一支原體的清除時間為2周左右,，感染多種支原體且非常嚴(yán)重的細(xì)胞，清除時間需要延長,，約3-4左右,；

5. 2-3周后,，再次進(jìn)行支原體檢測,，如果細(xì)胞支原體清除干凈，將換為支原體預(yù)防培養(yǎng)方案,，繼續(xù)維持一周左右時間,。如未清除干凈，則適當(dāng)延長1-2周繼續(xù)清除頑固支原體,，2周后再次進(jìn)行復(fù)檢,。

服務(wù)周期與價格

送樣要求

1. 復(fù)蘇細(xì)胞（充液運輸）：生長狀態(tài)良好的細(xì)胞，待達(dá)70%-80%匯合時,，去掉舊培養(yǎng)液換入新培養(yǎng)液,，量要達(dá)到培養(yǎng)瓶的頸部（過滿易污染），保留少許空間,，旋緊瓶蓋,，避免空氣過多運輸中氣泡運動易使細(xì)胞脫落。

2. 凍存細(xì)胞（干冰運輸）：將干冰提前置于塑料泡沫盒中,，以較快的速度將細(xì)胞凍存管從液氮轉(zhuǎn)入干冰中,，用膠帶封好泡沫盒，在外面加套一層紙盒,，延緩干冰揮發(fā),。

注：根據(jù)距離選擇泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小于 50mm,，內(nèi)部空間不小于200× 200× 200mm,，放入足量干冰。

支原體清除案例

如上圖1所示，左側(cè)為支原體污染的MCF-7細(xì)胞,，右側(cè)為支原體清除后的MCF-7細(xì)胞,，倒置顯微鏡下可明顯看出細(xì)胞間隙間黑點明顯減少，細(xì)胞邊緣清晰,，狀態(tài)良好,。

如上圖2所示，左側(cè)為支原體污染的Hep G2細(xì)胞,，右側(cè)為支原體清除試劑處理的Hep G2細(xì)胞,。左側(cè)有支原體污染的細(xì)胞樣品可以觀察到細(xì)胞核周圍微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光,。右側(cè)細(xì)胞支原體污染被清除干凈,，僅觀察到細(xì)胞核的藍(lán)色熒光，證明支原體已被清除干凈,。

注意事項

1. 由于各個實驗室細(xì)胞培養(yǎng)體系不同,，且更換體系細(xì)胞會需要一段時間的適應(yīng)，故本服務(wù)需客戶自行提供足量的培養(yǎng)體系,；

2. 根據(jù)客戶需求,，STR鑒定服務(wù)為選做項目，鏡像綺點生物承諾對于支原體清除服務(wù)細(xì)胞進(jìn)行單獨隔離培養(yǎng),，客戶為保證實驗嚴(yán)謹(jǐn)性,，可選擇我司進(jìn)行STR鑒定服務(wù)；

3. 由于細(xì)胞隨時可能會存在交叉的風(fēng)險,，只認(rèn)可我司接收細(xì)胞后第yi時間進(jìn)行的STR鑒定結(jié)果,；

提供結(jié)果

原始支原體PCR結(jié)果圖片和無支原體污染的細(xì)胞（根據(jù)客戶需要選擇充復(fù)蘇/凍存發(fā)貨形式）。

保密承諾

我公司鄭重承諾：客戶提供產(chǎn)品的檢測信息與數(shù)據(jù),，履行保密義務(wù),，未經(jīng)客戶許可，不得擅自公開發(fā)表或使用,，不得泄露給第三方,。

支原體清除試劑

另外，鏡像綺點還提供可有效抑制并清除多種支原體的支原體清除劑,，包括 Mycoplasma orale, M. arginini, M. hyorhinis和Acholeplasma laidlawii,。經(jīng)過大量實驗驗證對細(xì)胞幾乎沒有毒性，對細(xì)胞的各種檢測沒有干擾,。通常在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入本試劑約1至2周即可有效抑制和清除支原體,。

iCell支原體清除劑為透明淡黃色液體。具體的工作濃度因支原體的種類不同而有所不同,，在實際防止支原體污染或清除支原體污染時需摸索適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛取?/p>

支原體清除試劑經(jīng)過了上百種細(xì)胞的測試和長期的實驗驗證,，對細(xì)胞無害,，對清除支原體污染*，能夠很好的抑制和殺滅支原體,。

所以,，科研小伙伴們?nèi)绻銈兪掷镎滟F的細(xì)胞被支原體污染了，沒有辦法做實驗,，沒有其他地方采購,，千萬不要扔掉，交給我們,，相信我們,，我們會還你一個狀態(tài)好又無污染的好細(xì)胞，而且我們保證,，不成功不收費的哦~~~