J774A.1 小鼠單核巨噬細胞/鏡像綺點（iCell）介紹

該細胞來源于BABL/cN小鼠,，有抗體依賴的吞噬作用,，生長受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的抑制,；可產(chǎn)生IL-1β和大量的溶菌酶,。

細胞特性

1） 來源：BABL/cN小鼠淋巴 

2） 形態(tài)：單核細胞/巨噬細胞樣

3） 含量：>1x106 個/mL

4） 污染：支原體、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：

（1）干冰運輸,，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞,，收到后應(yīng)繼續(xù)生長,，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟,。

 （3）收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染,，請及時拍照與我們聯(lián)系,。

J774A.1 小鼠單核巨噬細胞/鏡像綺點（iCell）用途：僅供科研使用。

細胞接受后的處理：

1） 收到細胞后,，請檢查是否漏液,，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們,。

2） 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài),，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,，添加6ml新的培養(yǎng)基,。

4） 如果細胞長滿（90%以上）請及時進行細胞傳代。

5） 接到細胞次日,，請檢查細胞是否污染,，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM培養(yǎng)基,；北美胎牛血清,，10%；雙抗,，1%,。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

如果有細胞刮子，可按以下方法操作：

Protocol: Subcultures are prepared by  scraping.

 For a 25 cm2  flask, remove all but 5 ml of the culture medium. (adjust volume accordingly  for different culture vessels) Dislodge cells from the flask substrate with a  cell scraper, aspirate and dispense into new flasks.

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為例；

1．細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。

3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

鏡像綺點（上海）細胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一、原代細胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源
               原代細胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑,、kit,、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實驗外包服務(wù)

        二、細胞系服務(wù)：
               細胞株/系培養(yǎng),、增殖,、凍存和相關(guān)說明書
               細胞系培養(yǎng)過程的技術(shù)指導
               細胞系培養(yǎng)基、添加劑,、血清及相關(guān)生長因子,、試劑等

        三、iPS細胞服務(wù)：
               iPS細胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無滋養(yǎng)層）
               iPS細胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實習
               新藥及實驗儀器上市前評估

        四,、其他技術(shù)外包服務(wù),、客戶定制服務(wù)等

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