PC3人胰腺癌細胞

細胞特性

1)來源：胰腺癌

2)形態(tài)：上皮細胞樣,，貼壁生長

3)含量：>lxl06 個/mL

4)污染：支原體,、細菌,、酵母和真菌檢測為陰性

5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝

運輸和保存：使用T25瓶充液發(fā)送活細胞。收到細胞后,，請先在顯微鏡下檢查細 胞生長狀態(tài),，并將T25瓶置于培養(yǎng)箱約6h或過夜后，再次檢查細胞狀態(tài),。若狀 態(tài)良好,，可進行細胞后續(xù)處理操作，按照以下方式進行,。若發(fā)現(xiàn)可疑污染物,，請 及時與我們取得聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用,。

PC3人胰腺癌細胞

細胞培養(yǎng)步驟

1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1.準備F-12K培養(yǎng)基（F-12K : GIBCO,貨號：21127-022);北美胎牛血清,，10%; PS 1%。

2.培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%;二氧化碳,，5%。溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%,。

3.凍存液：90%血清，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。

2)細胞處理：

1. 復蘇細胞：將含有l(wèi)mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍,，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入l〇cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢 查細胞密度。

2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培

養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化,。

按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分 鐘,，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中,。

3.細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。

下面T25瓶為例,；

細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細 胞變圓脫落后,，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存 管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。

將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液 氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

注意事項：

收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染， 請立即與我們聯(lián)系,。

所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內操作， 并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。