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細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中細(xì)胞進(jìn)行保種并長期保存的常用方法,，其中細(xì)胞凍存液,，作為細(xì)胞凍存時(shí)必須使用的一種溶液,，不僅僅是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存,，在細(xì)胞的購買,、寄贈(zèng),、交換和運(yùn)送過程中也起著關(guān)鍵作用，因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要,。
無血清細(xì)胞凍存液是指不含血清和動(dòng)物源成分的細(xì)胞凍存液,，對比傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液存在的優(yōu)勢：
1.是一種通用型的細(xì)胞凍存液，可用于凍存人和各種動(dòng)物細(xì)胞株,；
2.凍存液配方,，即開即用，方便快捷,；
3.非程序降溫,，-80℃低溫冰箱長期凍存，也可液氮凍存,；
4.特別配方（主要成分為DMSO和氨基酸）具有有效提高細(xì)胞凍存活率和復(fù)蘇活力,；
5.不含動(dòng)物來源性蛋白，能減少各類病毒,、霉菌和支原體等的污染,，確保凍存細(xì)胞安全；
6.可孔板（細(xì)胞培養(yǎng)板）凍存，可用于雜交瘤細(xì)胞的凍存液.
無血清細(xì)胞凍存液操作步驟,，簡單,、方便：
一、細(xì)胞冷凍保存方法：
選擇凍存處于對數(shù)生長期的細(xì)胞有助于提高復(fù)蘇細(xì)胞存活率,。
凍存管凍存方式：
1,、按照常用方法收集懸浮細(xì)胞或貼壁細(xì)胞于試管中。
2,、按照培養(yǎng)細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存細(xì)胞數(shù),。（參考：5×105至5×106 cells/ml）。
3,、取相當(dāng)于所需細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞懸浮液量,，置于離心管中，離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm,，4℃,，3~5 min）。移去離心管中的上清液,。
4,、加入適量無血清細(xì)胞凍存液于離心管中，使細(xì)胞濃度為5×105至5×106 cells/ml,。緩慢混合均勻,，制成細(xì)胞混合液。
5,、將離心管中的細(xì)胞混合液分裝于已標(biāo)示的冷凍保存管中,。
6、直接將含細(xì)胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱,，冷凍保存,。
7、若研究者需要液氮保存時(shí),，可先放入-80℃冰箱過夜后,，再移至-196℃液氮罐。
原位凍存方式：
1,、從培養(yǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞培養(yǎng)板中將培養(yǎng)基上清吸取干凈,。
2、加入適量無血清細(xì)胞凍存液于培養(yǎng)孔板中,，充分浸潤細(xì)胞,。
3、蓋上蓋板,，做好密封措施,，防止染菌。
4,、直接將含凍存液的細(xì)胞培養(yǎng)板放入-80℃冰箱,，冷凍保存。
二,、凍存細(xì)胞復(fù)蘇方法
凍存管復(fù)蘇方式：
1,、從冰箱取出凍存細(xì)胞管，立即放入37℃水浴槽中快速解凍,。
2,、待凍存的細(xì)胞懸液融化后，立即加入1 ml細(xì)胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細(xì)胞混合,，再將細(xì)胞混合液從凍存管中移入含有9 ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的試管中,，混合均勻。
3,、離心收集培養(yǎng)細(xì)胞（參考離心條件：1,000~2,000 rpm,，4℃，3~5 min）,，移去上清液,。
4、清洗細(xì)胞,，充分洗凈殘留凍存液,。
5、加入適量新鮮培養(yǎng)基,，使用移液管緩緩地均勻細(xì)胞混合液,。適量地稀釋后，將細(xì)胞混合液移至事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)瓶中,。
6,、鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),。
原位復(fù)蘇方式：
1,、從冰箱取出凍存培養(yǎng)板，立即放入37℃水浴槽中快速解凍,。
2,、待凍存的細(xì)胞懸液融化后，輕輕吸去細(xì)胞凍存液,，按照常規(guī)換液操作加入新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng),。
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