不同細(xì)胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同,，但細(xì)胞系的選擇通常是根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要，因此在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)前應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn),，通過這些資料可選擇適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑,。當(dāng)然,，適合的是高效,、低毒、方便,、廉價(jià)的轉(zhuǎn)染試劑,。

　　2．細(xì)胞狀態(tài)

　　一般低的細(xì)胞代數(shù)（<50）能確保基因型不變,。適合轉(zhuǎn)染的細(xì)胞是經(jīng)過幾次傳代后達(dá)到指數(shù)生長期的細(xì)胞,，細(xì)胞生長旺盛，最容易轉(zhuǎn)染,。細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室中保存數(shù)月和數(shù)年后會(huì)經(jīng)歷突變,，總?cè)旧w重組或基因調(diào)控變化等而演化。這會(huì)導(dǎo)致和轉(zhuǎn)染相關(guān)的細(xì)胞行為的變化,。也就是說同一種系的細(xì)胞株,，在各實(shí)驗(yàn)室不同培養(yǎng)條件下,，其生物學(xué)性狀發(fā)生不同程度的改變，導(dǎo)致其轉(zhuǎn)染特性也發(fā)生變化,。因此,，如果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染效率降低，可以試著轉(zhuǎn)染新鮮培養(yǎng)的細(xì)胞以恢復(fù)最佳結(jié)果,。

　　3．轉(zhuǎn)染方法

　　不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法,，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時(shí)應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法,，但也要注意,，因不同實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異,，操作手法上的差異等,，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件來確定最佳轉(zhuǎn)染條件,。

　　（1）細(xì)胞培養(yǎng)物

　　健康的細(xì)胞培養(yǎng)物是成功轉(zhuǎn)染的基礎(chǔ),。不同細(xì)胞有不同的培養(yǎng)基,，血清和添加物。高的轉(zhuǎn)染效率需要一定的細(xì)胞密度,，一般的轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)有專門的說明,。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)分細(xì)胞，這將提供正常細(xì)胞代謝,，增加對(duì)外源DNA攝入的可能,。一定要避免細(xì)菌，支原體或真菌的污染,。

　?。?）細(xì)胞密度

　　細(xì)胞密度對(duì)轉(zhuǎn)染效率有一定的影響。不同的轉(zhuǎn)染試劑,，要求轉(zhuǎn)染時(shí)的最適細(xì)胞密度各不相同,，即使同一種試劑，也會(huì)因不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異,。轉(zhuǎn)染時(shí)過高或者過低的細(xì)胞密度會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低,，乃至表達(dá)水平偏低。因此如果選用新的細(xì)胞系或者新的轉(zhuǎn)染試劑,，最好能夠進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)并為以后的實(shí)驗(yàn)建立一個(gè)穩(wěn)定方法,，包括適當(dāng)?shù)慕臃N量和培養(yǎng)時(shí)間等等。陽離子脂質(zhì)體具有微量的細(xì)胞毒性而往往需要更高的鋪板密度或者更多的懸浮細(xì)胞數(shù),，有的要求細(xì)胞90%匯片,；而有些多胺或者非脂質(zhì)體的配方則要求在40%-80%之間,，總之是盡量在細(xì)胞最適的生理狀態(tài)下轉(zhuǎn)染，以求最佳的轉(zhuǎn)染效果,。不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊矔?huì)影響轉(zhuǎn)染時(shí)的鋪板密度,，比如研究細(xì)胞周期相關(guān)基因等表達(dá)周期長的基因，就需要較低的鋪板密度,，所以需要選擇能夠在較低鋪板密度下進(jìn)行轉(zhuǎn)染的試劑,。一般轉(zhuǎn)染時(shí)貼壁細(xì)胞密度為50%-90%，但這個(gè)需要參考所選轉(zhuǎn)染試劑的說明書,。

　?。?）血清

　　血清一度曾被認(rèn)為會(huì)降低轉(zhuǎn)染效率，老一代的轉(zhuǎn)染方法往往要求轉(zhuǎn)染前后洗細(xì)胞或者在無血清培養(yǎng)基條件下轉(zhuǎn)染,，但有些對(duì)此敏感的細(xì)胞如原代細(xì)胞會(huì)受到損傷,，甚至死亡導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率極低。不過轉(zhuǎn)染產(chǎn)品配方幾經(jīng)革新后的今天,，對(duì)于主流的轉(zhuǎn)染試劑來說,，血清的存在已經(jīng)不會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率，甚至還有助于提高轉(zhuǎn)染效率,，如陽離子聚合物等,，血清的存在會(huì)影響DNA—轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成，但只要在DNA-轉(zhuǎn)染復(fù)合物形成時(shí)用無血清培養(yǎng)基或PBS來稀釋DNA和轉(zhuǎn)染試劑就可以了,，在轉(zhuǎn)染過程中是可以使用血清的,。不過要特別注意：對(duì)于RNA轉(zhuǎn)染，如何消除血清中潛在的RNase污染是值得關(guān)注的,。胎牛血清（FCS）經(jīng)常用到,，便宜一點(diǎn)的有馬或牛血清。通常的,，血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物,，對(duì)不同細(xì)胞的生長作用有很大的差別。血清質(zhì)量的變化直接影響細(xì)胞生長,，因此也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率,。新加培養(yǎng)基的預(yù)熱對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染很有幫助。

　?。?）抗生素

　　細(xì)胞培養(yǎng)過程中往往會(huì)添加抗生素來防止污染,，但是這些添加劑可能對(duì)轉(zhuǎn)染造成麻煩。比如青霉素和鏈霉素,，就是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物,。這些抗生素一般對(duì)于真核細(xì)胞無毒，但有些轉(zhuǎn)染試劑增加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞,。這可能間接導(dǎo)致細(xì)胞死亡,，造成轉(zhuǎn)染效率低。目前轉(zhuǎn)染試劑因?yàn)槿潭伎梢杂糜醒搴涂股氐忍砑觿┑呐囵B(yǎng)基來操作,，非常方便,，省去了污染等麻煩。

　?。?）氮磷（N/P）比

　　N/P比是轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵（為了換算方便,，一般以DNA/轉(zhuǎn)染試劑質(zhì)量比表示），在一定比例范圍內(nèi)轉(zhuǎn)染效率隨N/P比成比例增高,，之后達(dá)到平值,，但毒性也隨之而增加，因此在實(shí)驗(yàn)之前應(yīng)根據(jù)推薦比例,，確定本實(shí)驗(yàn)的轉(zhuǎn)染比例,。

　　（6）DNA質(zhì)量

　　DNA質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響非常大,。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)（如脂質(zhì)體等）基于電荷吸引原理,，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子,，蛋白,，代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成及轉(zhuǎn)染的進(jìn)行，但對(duì)GenEscort系列轉(zhuǎn)染試劑影響不大,。核酸純化提供的超純質(zhì)粒抽提試劑盒,，能達(dá)到兩倍2×CsCl梯度離心以上的純度效果,，使您不必為DNA質(zhì)量操心,。此外，對(duì)一些內(nèi)毒素敏感的細(xì)胞（如原代細(xì)胞,，懸浮細(xì)胞和造血細(xì)胞）,，QIAGEN還提供可去除內(nèi)毒素污染的質(zhì)粒抽提試劑盒，在質(zhì)粒抽提過程中有效去除脂多糖分子,，保證理想的轉(zhuǎn)染效果,。但如果使用GenEscort轉(zhuǎn)染試劑，一般不需要這么高的DNA質(zhì)量要求,。當(dāng)使用GenEscort轉(zhuǎn)染試劑時(shí),，即使采用傳統(tǒng)的酚－氯仿沉淀方法純化質(zhì)粒，仍然可達(dá)到非常好的轉(zhuǎn)染效果,，但所用的質(zhì)粒量比試劑盒純化方法的DNA用量大一些,。