人TATA盒結(jié)合蛋白Elisa試劑盒
- 公司名稱(chēng) 上海雅吉生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷(xiāo)商
- 更新時(shí)間 2024/10/28 12:04:49
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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實(shí)驗(yàn)原理:
人TATA盒結(jié)合蛋白Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平,。用純化的轉(zhuǎn)移酶水解酶(XTH)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,,往包被的微孔中依次加入,,再與HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中含量,。
?本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿,、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中的活性,。
?有效期:6個(gè)月
?保存條件:2-8℃
?僅供科研使用,不得用于臨床診斷
檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:
1.請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,,平衡至室溫,。
2.從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正?,F(xiàn)象,;放置室溫,輕搖均勻,,待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液,。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成500ml工作濃度的洗滌液,,未用完的放回4℃
3.20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按1:20稀釋?zhuān)?份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。
實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材:
1.酶標(biāo)儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
3.37℃恒溫箱
4.蒸餾水或去離子水
人TATA盒結(jié)合蛋白Elisa試劑盒組成:
備注:
1.(96T/48T)打開(kāi)包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全。
2.標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:200,、100,、50、25,、12.5,、0 mU/mL
樣本處理及要求:
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,,混合10-20分鐘后,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,,保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心。
3. 尿液:用無(wú)菌管收集,,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),,用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右,。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)再次離心,。
5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量,。加入一定量的PBS,,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用,。
6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性,。
注意事項(xiàng):
1.嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑,。
2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉,。
3.消除板底殘留的液體和手指印,,否則影響OD值,。
4.底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。
6.在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7.平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9.不能使用過(guò)期產(chǎn)品,不同批號(hào)組分不得混用,。
10.如果可能傳播疾病,,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置,。
操作步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;,。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外,。
4.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
5.配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。
7.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
8.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
9.測(cè)定:以空白孔調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行,。
計(jì)算:
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),,OD值為縱坐標(biāo),,
在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,,根據(jù)樣品的OD
值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋
倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,,將樣品的OD值
代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋 (此圖僅供參考)
倍數(shù),,即為樣品的實(shí)際濃度。
試劑盒性能:
1.檢測(cè)范圍:6.25 mU/mL - 200 mU/mL
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于1.0 mU/mL
性能:
1.檢測(cè)范圍:6.25 mU/mL - 200 mU/mL
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%
靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于1.0 mU/mL