產(chǎn)品名稱(chēng)：HePa1-6小鼠肝癌細(xì)胞（C57BL小鼠）

規(guī)格：70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶
特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右
包裝：內(nèi)層無(wú)菌自封袋,；防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋,；說(shuō)明書(shū)
細(xì)胞來(lái)源：ATCC,、sciencell、ICLC
貨期：1-2周
運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸
售后：收到細(xì)胞后7天,，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染,，死亡，快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí),，應(yīng)出具書(shū)面質(zhì)量問(wèn)題報(bào)告并及時(shí)傳真或致銷(xiāo)售人員,，我們將盡快為您解決。

細(xì)胞培養(yǎng)常見(jiàn)問(wèn)題分析

細(xì)胞培養(yǎng)
1,、冷凍管應(yīng)如何解凍,？
取出冷凍管后， 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍,， 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化,， 并注意水面不可超過(guò)冷凍管蓋沿， 否則易發(fā)生污染情形,。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí),， 必須注意安全， 預(yù)防冷凍管之爆裂,。HePa1-6小鼠肝癌細(xì)胞（C57BL小鼠）
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),， 是否應(yīng)馬上去除DMSO,？
除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感之細(xì)胞外， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）,， 在解凍之后,， 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題,。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,？
不能,。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,， 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng),， 造成細(xì)胞無(wú)法存活。
4,、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi),？
不能,。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源， 所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響,。來(lái)自不同物種的血清,， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活,。
5,、何謂FBS, FCS, CS, HS ?
FBS （fetal bovine serum） 和FCS （fetal calf serum） 是相同的意思， 兩者都是指胎牛血清,， FCS 乃錯(cuò)誤的使用字眼,， 請(qǐng)不要再使用。CS （calf serum） 則是指小牛血清,。HS （horseserum） 則是指馬血清,。
6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5 % 或10% CO2,？或根本沒(méi)有影響,？
一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作為pH 的緩沖系統(tǒng)， 而培養(yǎng)基中NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2 濃度,。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 含量為每公升3.7 g 時(shí),，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10 % CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3 為每公升1.5 g 時(shí),， 則應(yīng)使用5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞,。
7、何時(shí)須更換培養(yǎng)基,？
視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定,， 或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可,。
8,、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？
除于特殊篩選系統(tǒng)中外,， 一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。
9,、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之trypsin-EDTA 濃度,？應(yīng)如何處理？
一般使用之trypsin-EDTA 濃度為0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na,。*次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中,， 保存于–20 ℃，避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin 之活性降低,， 并可減少污染之機(jī)會(huì),。
10,、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處理？
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,， 稀釋細(xì)胞濃度即可,， 若培養(yǎng)液太多時(shí)， 可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,， 直到無(wú)法容納為止,。分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶， 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度,， 重復(fù)前述步驟即可,。
11、欲將一般動(dòng)物細(xì)胞離心下來(lái),，其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速,？
欲回收動(dòng)物細(xì)胞， 其離心速率一般為300xg （約1,000rpm）,，5 - 10 分鐘,， 過(guò)高之轉(zhuǎn)速， 將造成細(xì)胞死亡,。
12,、細(xì)胞之接種密度為何？
依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤(pán)之比例接種即可,。細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因,。
13、細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何,？
動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide） 和90 - 95 % 原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之,。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能， 故不可將DMSO 直接加入細(xì)胞液中,， 必須使用前先行配制完成。
14,、DMSO 之等級(jí)和無(wú)菌過(guò)濾之方式為何,？CBRH7919  大鼠肝癌細(xì)胞（wistar 大鼠）
冷凍保存使用之DMSO 等級(jí)， 必須為T(mén)issue culture grade之DMSO （如Sigma D2650）,， 其本身即為無(wú)菌狀況,， *次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中， 保存于4°C,， 避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì),， 并可減少污染之機(jī)會(huì)。若要過(guò)濾DMSO,， 則須使用耐DMSO 之Nylon 材質(zhì)濾膜,。
15,、冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大,，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
15、細(xì)胞欲冷凍保存時(shí),， 細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度,？
冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial， 融合瘤細(xì)胞則以5x106 cells/ml vial 為宜,。
16,、應(yīng)如何避免細(xì)胞污染？
細(xì)胞污染的種類(lèi)可分成細(xì)菌,、酵母菌,、霉菌、病毒和霉?jié){菌,。主要的污染原因?yàn)闊o(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng),、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等,。嚴(yán)格之無(wú)菌操作技術(shù),、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法,。
17,、如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理,？
加入相應(yīng)抗生素,。直接滅菌后丟棄之。
18,、支原體（mycoplasma） 污染的細(xì)胞,， 是否能以肉眼觀(guān)察出異狀？
不能,。除極有經(jīng)驗(yàn)之專(zhuān)家外,，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株，無(wú)法以其外觀(guān)分辨之,。
19,、支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響,？
支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù)， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前,，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。
20,、CO2 培養(yǎng)箱之水盤(pán)如何保持清潔？
定期（至少每?jī)芍芤淮危?nbsp;以無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子水更換之,。
21,、為何培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中， 顏色會(huì)偏暗紅色,， 且pH值會(huì)越來(lái)越偏堿性,？
培養(yǎng)基保存于4 ℃ 冰箱中， 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會(huì)逐漸溢出,，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性,。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑（通常為phenol red） 的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,， 將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡,。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)， 可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO2,， 以調(diào)整pH 值,。
22、各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish,，flask是否均相同,？
不同廠(chǎng)牌的dish 或flask， 其所coating 的polymer 不同,， 制造程序亦不同,， 雖對(duì)大部分細(xì)胞沒(méi)有太大之影響， 惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠(chǎng)牌不同之dish 或flask 而有顯著之生長(zhǎng)差異,。
23,、購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形,？ 購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)存活率不佳,， 常見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯(cuò)誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳,。血清使用錯(cuò)誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過(guò)程錯(cuò)誤,。冷凍細(xì)胞解凍后,， 加以洗滌細(xì)胞和離心,。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯(cuò)誤,。細(xì)胞置于–80℃太久,。
24、收到之冷凍管瓶身破裂,，瓶蓋有裂紋,，或瓶蓋脫落之原因？
冷凍管瓶蓋裂紋,，或瓶身破裂,，可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時(shí)用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損,，建議使用止血鉗小心夾取,。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊 ,。
25,、如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)條件,。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?，*MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始,，各種目的無(wú)血清培養(yǎng)*AIM V（12005）培養(yǎng)基（SFM）,。
26、L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎,？它在溶液中不穩(wěn)定嗎,？
L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后,，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解,，但是確切的降解率一直沒(méi)有zui終定論,。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。
27,、GlutaMAX-I是什么,？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定,？
GlutaMAX-I 二肽是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用,。 GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘,，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解,，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解,。
28,、什么培養(yǎng)基中可以省去加酚紅？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來(lái)作為PH值的指示劑：中性時(shí)為紅色,，酸性時(shí)為黃色,，堿性時(shí)為紫色。研究表明,，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用,，（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應(yīng),，培養(yǎng)細(xì)胞,，尤其是哺乳類(lèi)細(xì)胞時(shí)，用不加酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測(cè),，一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，不使用加有酚紅的培養(yǎng)基,。
29,、培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà),，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉,。
30、二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎,？使用胰蛋白酶時(shí)加入EDTA的目的是什么,？
二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性,。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用EDTA清洗細(xì)胞,，以消除來(lái)自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子,。
31、書(shū)上說(shuō),，Hank‘s 平衡鹽溶液（HBS）要在空氣中使用,，不需要CO2培養(yǎng)箱。原因是什么,？Hank’s 平衡鹽溶液（HBS）和Earle‘s平衡鹽溶液（EBS）有什么本質(zhì)的功能差別,？
HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagles （2.2g/L）中比在Hanks （0.35g/L） 中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,，以維持溶液的PH值,。Eagles液在空氣水平的CO2 中，溶液會(huì)變堿,，Hanks液在CO2培養(yǎng)箱中會(huì)變酸,。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織，需要用Eagles液,，,。如果僅僅是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲(chǔ)存的組織，用Hanks液就可以了,。