三,、預(yù)期用途 偽狂犬病毒（Pseudorabies disease virus,，PRV）可引起豬偽狂犬病，導(dǎo)致懷孕母豬流產(chǎn)死胎,、種豬不育,、仔豬發(fā)病死亡等綜合癥候群。

本試劑盒用于檢測豬血清,、血漿中豬偽狂犬病毒抗體,，可用于豬偽狂犬病毒疫苗免疫效果評價。

四,、試劑盒原理

   本試劑盒系由預(yù)包被豬偽狂犬病毒重組gD蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清,、血漿樣本中豬偽狂犬病毒抗體,。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬偽狂犬病毒抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬偽狂犬病毒抗體,。

五,、試劑盒組成

酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液,、濃縮洗滌液、底物液A,、底物液B,、陽性對照、陰性對照

六,、儲存及有效期

于2～8℃避光保存,，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮,。使用期限為2個月。

七,、適用儀器   含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器,。

操作步驟

一,、樣品準(zhǔn)備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，*需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。

二、檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻,，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次，拍干,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl，混勻,，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。

結(jié)果分析

一,、參考值

實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10,，陽性對照≥0.6,。

二、檢驗結(jié)果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性,；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,；樣品A值＜0.2為陰性。

2.本實驗結(jié)果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足,，建議補打相應(yīng)疫苗,。