三,、預(yù)期用途 日本乙型腦炎又名流行性乙型腦炎是由日本乙型腦炎病毒（Japanese encephalitis virus,，JEV）引起的一種急性人獸共患傳染病?？梢鹭i乙型腦炎,，主要特征為高熱、流產(chǎn),、死胎和公豬睪丸炎,。

本試劑盒用于檢測(cè)豬血清、血漿中豬乙型腦炎病毒抗體,，可用于豬乙型腦炎病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià),。

四、試劑盒原理

   本試劑盒系由預(yù)包被豬乙型腦炎病毒重組E2蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清,、血漿樣本中豬乙型腦炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬乙型腦炎病毒抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬乙型腦炎病毒抗體,。

五、試劑盒組成

酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液、濃縮洗滌液,、底物液A,、底物液B、陽性對(duì)照,、陰性對(duì)照

六,、儲(chǔ)存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個(gè)月,。

包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個(gè)月,。

七,、適用儀器   含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備,，可調(diào)微量移液器。

操作步驟

一,、樣品準(zhǔn)備

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，*需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,，混勻）,。陰、陽性對(duì)照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

二,、檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對(duì)照1孔,、陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存,。

3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A值）,。

結(jié)果分析

一、參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下,，陰性對(duì)照≤0.10,，陽性對(duì)照≥0.6。

二,、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性,；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑；樣品A值＜0.2為陰性,。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明豬只抗體水平不足,，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗。