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羊小反芻獸疫病毒抗體檢測試劑盒

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羊小反芻獸疫病毒

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三、預(yù)期用途  

小反芻獸疫是由小反芻獸疫病毒(Peste des Petits Ruminants Virus,,PPRV)引起的一種急性接觸性傳染病,,其特征為口腔、舌粘膜糜爛,、流淚,、流鼻液。本病的易感動物為山羊,,也可感染綿羊,、白尾鹿等,但對牛無感染性,。

本試劑用于檢測羊血清中小反芻獸疫病毒抗體,,可用于小反芻獸疫疫苗免疫效果評價。

四,、試劑盒原理

本試劑盒系由預(yù)包被小反芻獸疫病毒重組抗原的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測羊血清,、血漿樣本中小反芻獸疫病毒抗體,。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有小反芻獸疫病毒抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,,與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色,;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有小反芻獸疫病毒抗體。

四,、試劑盒原理

   本試劑盒系由預(yù)包被弓形蟲(TOX)重組抗原的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清,、血漿樣本中弓形蟲抗體,。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有弓形蟲抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,,在孔中加TMB底物液,,與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),;加入終止液終止反應(yīng)后,,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有弓形蟲抗體,。

五、試劑盒組成

酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液、濃縮洗滌液,、底物液A,、底物液B、陽性對照,、陰性對照

六,、儲存及有效期

于2~8℃避光保存,有效期為12個月,。

包被板開封后請于2~8℃避光保存,,避免受潮。使用期限為2個月,。

七,、適用儀器   含450nm、630nm波長的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,,可調(diào)微量移液器,。

操作步驟

一、樣品準備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,,要求血清清亮,,無溶血、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,,*需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,,混勻),。陰、陽性對照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

二,、檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,,恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,,設(shè)空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,,2~8℃保存,。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl;陰,、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

4.混勻,,置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,,拍干,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌,,同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,,混勻,,37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl,,混勻,,用空白孔調(diào)零,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值),。

結(jié)果分析

一,、參考值

實驗正常的情況下,陰性對照≤0.10,,陽性對照≥0.6,。

二、檢驗結(jié)果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性,;樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,;樣品A值<0.2為陰性。

2.本實驗結(jié)果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足,,建議補打相應(yīng)疫苗,。



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