三,、預期用途 偽狂犬病是由偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus，PRV)引起的一種傳染病,，導致懷孕母豬流產(chǎn)死胎,、種豬不育、仔豬發(fā)病死亡等綜合癥候群,。該病免疫預防用的疫苗為gE基因缺失疫苗（也有聯(lián)用gI,、TK基因缺失）,因此檢測gE蛋白的抗體可作為野毒感染的指標。

本試劑盒用于檢測豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體,，區(qū)別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬,。

四、試劑盒原理

   本試劑盒系由預包被豬偽狂犬病毒重組gE蛋白的酶標板,、酶標記物及其他配套試劑組成,，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體,。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體，則將與酶標板上抗原結合,，經(jīng)洗滌除去未結合的其他成分后,；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合,；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶標記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關,；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體。

五,、試劑盒組成

酶標板,、酶標記物、樣品稀釋液,、濃縮洗滌液,、底物液A,、底物液B、陽性對照,、陰性對照

六,、儲存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個月,。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮,。使用期限為2個月,。

七、適用儀器   含450nm,、630nm波長的酶標儀,，37℃恒溫設備，可調(diào)微量移液器,。

操作步驟

一,、樣品準備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，*需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。

二、檢驗方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復至室溫,。

2.取所需用量酶標板條，設空白對照1孔,、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復洗滌5次,，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應30分鐘,。

7.洗滌，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl，混勻,，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

結果分析

一,、參考值

實驗正常的情況下,，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6,。

二,、檢驗結果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,；樣品A值＜0.2為陰性,。

2.本實驗結果為陰性或可疑時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗,。