一、產(chǎn)品名稱

通用名：豬流行性腹瀉病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Epidemic Diarrhea Virus (ELISA)

二,、包裝規(guī)格  96T×1/盒,、96T×2/盒

三、預(yù)期用途  豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus,，PEDV）引起的豬的一種高度接觸性腸道傳染病,，以嘔吐、腹瀉和食欲下降為基本特征,，各種年齡的豬均易感,。

本試劑盒用于檢測(cè)豬血清、血漿中豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV-Ab）,，可用于豬流行性腹瀉病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià),。

四、試劑盒原理

   本試劑盒系由預(yù)包被豬流行性腹瀉病毒（PEDV）重組N蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)豬血清、血漿樣本中豬流行性腹瀉病毒抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬流行性腹瀉病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬流行性腹瀉病毒抗體。

五,、試劑盒組成

酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液,、底物液A,、底物液B、陽性對(duì)照,、陰性對(duì)照

六、儲(chǔ)存及有效期

于2～8℃避光保存,，有效期為12個(gè)月,。

包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存，避免受潮,。使用期限為2個(gè)月,。

七、適用儀器   含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器,。

操作步驟

一,、樣品準(zhǔn)備

1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，*需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對(duì)照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。

二、檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔,、陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。

3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl，混勻,，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測(cè)定各孔吸光值（A值）。

結(jié)果分析

一,、參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下,，陰性對(duì)照≤0.10，陽性對(duì)照≥0.6,。

二,、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,；樣品A值＜0.2為陰性,。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。