三,、預(yù)期用途 口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）感染引起的偶蹄動物共患的急性,、熱性、接觸性傳染病,。在豬的預(yù)防免疫工作中,，zui值得關(guān)注的就是強(qiáng)化免疫的接種時(shí)機(jī)問題。在過高的抗體水平進(jìn)行免疫,，過高的抗體水平還會中和疫苗,，影響疫苗的免疫效果，導(dǎo)致免疫失??；在較低的抗體水平進(jìn)行免疫，又會出現(xiàn)抗體保護(hù)真空期,，威脅豬的健康,。

本試劑盒用于檢測豬血清,、血漿中豬口蹄疫病毒O型抗體，可用于豬口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果評價(jià),。

四,、試劑盒原理

   本試劑盒系由預(yù)包被豬口蹄疫病毒O型（OZK/93株+OS/99株）VP1表位多肽抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬口蹄疫病毒O型抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬口蹄疫病毒O型抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有豬口蹄疫病毒O型抗體。

五,、試劑盒組成

酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物、樣品稀釋液,、濃縮洗滌液,、底物液A、底物液B,、陽性對照,、陰性對照

六、儲存及有效期

于2～8℃避光保存,，有效期為12個(gè)月,。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮,。使用期限為2個(gè)月,。

七、適用儀器  含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

操作步驟

一,、樣品準(zhǔn)備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，*需置-20℃保存,。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,，混勻）。陰,、陽性對照不用稀釋,。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。

二,、檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌，同步驟5,。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl,，混勻，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）,。

結(jié)果分析

一、 參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下,，陰性對照≤0.10,，陽性對照≥0.6。

二,、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1.樣品A值≥0.38為陽性；樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,；樣品A值＜0.2為陰性,。

2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性或可疑時(shí)表明豬只抗體水平不足，建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。