人抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體（anti-dsDNA Ab）酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用
 
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清、血漿或其它相關(guān)液體中抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體（anti-dsDNA Ab）含量,。
概述
抗雙鏈DNA抗體又稱為抗天然DNA抗體,，是抗核抗體的一種類型,，幾乎所有紅斑狼瘡病人都有該抗體的升高,。目前認(rèn)為，它在紅斑狼瘡的發(fā)病中起一定的作用,，在一些病人中,，DNA的大分子可存在于循環(huán)血液中或者粘附于多種器官的微血管上,，如腎臟、肺和腦組織,，與血液中的自身抗體結(jié)合,，形成循環(huán)免疫復(fù)合物，導(dǎo)致組織損傷,。目前抗雙鏈DNA抗體多見于狼瘡性腎炎中,，約50％以上的狼瘡性腎炎病人循環(huán)血液中的DNA濃度較正常健康人高?！　?br />　　一般認(rèn)為抗雙鏈DNA的效價與病情相平行,，即病情活動時，抗DNA抗體效價升高,，病情緩解時,，效價降低。由于各地測定的方法不同,，所以正常值也不同,，一般來說，結(jié)合率要大于20％以上才有臨床意義,。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測定標(biāo)本中anti-dsDNA Ab水平,。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入anti-dsDNA Ab抗原,、生物素化的抗人anti-dsDNA Ab抗體、HRP標(biāo)記的親和素,，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的anti-dsDNA Ab呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度,。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶,，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上,，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,，其濃度為400 ng/ml，做系列倍比稀釋后,，分別稀釋200 ng/ml,，100 ng/ml，50 ng/ml,，25 ng/ml,，12.5 ng/ml,，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml,，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml,，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制200 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml 400 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,，混勻即可,，其余濃度以此類推。
2. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶,。
3. 檢測稀釋液A：1×10ml/瓶,。
4. 檢測稀釋液B：1×10ml/瓶。
5. 檢測溶液A：1×120ul/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋,，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制（每孔100ul）,，實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,，輕輕混勻,，在使用前一小時內(nèi)配制。
6. 檢測溶液B：1×120ul/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋,。稀釋方法同檢測溶液A,。
7. 底物溶液：1×10ml/瓶。
8. 濃洗滌液：1×30ml/瓶,，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。
9. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
標(biāo)本的采集及保存
1.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請離心后收集上清,，并將標(biāo)本保存于-20℃,，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血清：標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3.  血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測,。

操作步驟
實驗開始前,，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r,，均需混勻,，混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。如樣品濃度過高時,，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍,。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100ul,，注意不要有氣泡,，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘,。
為保證實驗結(jié)果有效性,，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,，甩干,，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100ul（取1ul檢測溶液A加99ul檢測稀釋液A的比例配制,，輕輕混勻,，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘,。
3. 溫育60分鐘后,，棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板3次,，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。
4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100ul，37℃,，60分鐘,。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體,，甩干,，洗板5次,，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔,，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）,。
6. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi),，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）,。
7. 依序每孔加終止溶液50ul,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）,。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測,。
注：
1. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑,，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4,。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
2. 為防止樣品蒸發(fā),，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。
3. 未使用完的酶標(biāo)板或者試劑,，請于2-8℃保存,。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液,、檢測溶液B工作液請依據(jù)所需的量配置使用,。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液,。
4. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定,，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水
紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,，根據(jù)需
要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中,。

特異性
    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人anti-dsDNA Ab，且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng),。
計算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對數(shù)坐標(biāo)）,，OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1. 洗滌過程非常重要,，不充分的洗滌易造成假陽性,。
2. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多,，*使用排槍加樣,。
3. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔,。
4. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù),。
5. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品,、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制,，不能混淆,。
6. 底物請避光保存。
檢測范圍：
3.12 ng/ml - 400 ng/ml
說明
1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中,。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導(dǎo)致出現(xiàn)錯誤的結(jié)果,。
2. 小心吸取試劑并嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度,。請注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品，酶結(jié)合物或底物時,，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。而且,，洗滌不充分將影響試驗結(jié)果,。
3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃,，具體以標(biāo)簽上的標(biāo)示為準(zhǔn),。
4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,。
5. 剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會對實驗結(jié)果造成任何影響,。
6. 中、英文說明書可能會有不*之處,，請以英文說明書為準(zhǔn),。
7. 所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
8. 有效期：6個月

相關(guān)產(chǎn)品：

MEC 重組人粘膜相關(guān)上皮細(xì)胞趨化因子（CCL28） CHM-353 Recombinant Human Mucosae-Associated Epithelial Chemokine （CCL28）
MEC His 重組人粘膜相關(guān)上皮細(xì)胞趨化因子His CHM-366 Recombinant Human Mucosae-Associated Epithelial Chemokine （CCL28）, His Tag
MIG  CHM-333 Recombinant Human MIG （CXCL9）
rmMIG  CHM-337 Recombinant Mouse MIG （CXCL9）
MIP-1a 重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α（CCL3） CHM-233 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-1 alpha （CCL3）
MIP-1a, His 重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α（CCL3） CHM-347 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-1 alpha （CCL3）, His Tag
mMIP-1a 重組小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α（CCL3） CHM-320 Recombinant Mouse Macrophage Inflammatory protein-1 alpha （CCL3）
rMIP-1a 重組大鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1α（CCL3） CHM-343 Recombinant Rat Macrophage Inflammatory protein-1 alpha （CCL3）
MIP-1b 重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β（CCL4） CHM-276 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-1 beta （CCL4）
mMIP-1b 重組小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β（CCL4） CHM-321 Recombinant Mouse Macrophage Inflammatory protein-1 beta （CCL4）
MIP-3 重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白- 3（CCL23） CHM-358 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-3 （CCL23）
MIP-3b 重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3β（CCL19） CHM-287 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-3 beta （CCL19）
mMIP-3b 重組小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3β（CCL19） CHM-341 Recombinant Mouse Macrophage Inflammatory protein-3 beta （CCL19）
MIP-3α 重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白- 3α（CCL20） CHM-351 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-3 alpha （CCL20）
mMIP-3α 重組小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白- 3α（CCL20） CHM-236 Recombinant Mouse Macrophage Inflammatory protein-3 alpha （CCL20）
MIP-4  重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白4（CCL18） CHM-322 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-4 （CCL18）
MIP-5 重組人巨噬細(xì)胞炎性蛋白- 5（CCL15） CHM-230 Recombinant Human Macrophage Inflammatory protein-5 （CCL15）
NAP-2 重組人粒細(xì)胞激活蛋白2（CXCL7） CHM-274 Recombinant Human Neutrophil Activating Protein-2 （CXCL7）
PF-4 人類血小板因子4（CXCL4） CHM-234 Human Plaet Factor-4 （CXCL4）
PF-4 重組人血小板因子4（CXCL4） CHM-350 Recombinant Human Plaet Factor-4 （CXCL4）
PF 4 Variant-1 重組人血小板因子4（CXCL4） CHM-243 Recombinant Human Plaet Factor-4 （CXCL4） Variant-1
mPF 4 重組小鼠血小板因子4（CXCL4） CHM-245 Recombinant Mouse Plaet Factor-4 （CXCL4）
Rantes  CHM-328 Recombinant Human Rantes （CCL5）
Rantes His  CHM-361 Recombinant Human Rantes （CCL5） His Tag
rmRantes  CHM-342 Recombinant Mouse Rantes （CCL5）
rRantes  CHM-352 Recombinant Rat Rantes （CCL5）
SDF-1a 重組人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（CXCL12） CHM-262 Recombinant Human Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha （CXCL12）
SDF-1a, His 重組人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（CXCL12） CHM-241 Recombinant Human Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha （CXCL12） His-Tag
mSDF-1a 重組小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（CXCL12） CHM-324 Recombinant Mouse Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha （CXCL12）
rSDF-1a 重組大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1α（CXCL12） CHM-354 Recombinant Rat Stromal Cell-Derived Factor-1 alpha （CXCL12）
SDF-1b 重組人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1β（CXCL12） CHM-325 Recombinant Human Stromal Cell-Derived Factor-1 beta （CXCL12）
SDF-1b His 重組人基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1β（CXCL12） CHM-249 Recombinant Human Stromal Cell-Derived Factor-1 beta （CXCL12） His Tag
mSDF-1b 重組小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1β（CXCL12） CHM-326 Recombinant Mouse Stromal Cell-Derived Factor-1 beta （CXCL12）
fSDF-1b 重組貓基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1β（CXCL12） CHM-247 Recombinant Feline Stromal Cell-Derived Factor-1 beta （CXCL12）
rSDF-1b 重組大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1β（CXCL12） CHM-248 Recombinant Rat Stromal Cell-Derived Factor-1 beta （CXCL12）
TARC 重組人胸腺和活化調(diào)節(jié)趨化因子（CCL17） CHM-240 Recombinant Human Thymus and Activation Regulated Chemokine （CCL17）
TARC His 重組人胸腺和活化調(diào)節(jié)趨化因子（CCL17） His CHM-359 Recombinant Human Thymus and Activation Regulated Chemokine （CCL17） His Tag
TECK 重組人胸腺表達(dá)趨化因子 CHM-364 Recombinant Human Thymus Expressed Chemokine （CCL25）