液相色譜儀的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),，在兩相中作相對運動時,，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別,，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,，液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng),、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),。 液相色譜儀柱效項與色譜過程動力學(xué)特性有關(guān)，后兩項與色譜過程熱力學(xué)因素有關(guān),。
從基本分離方?？煽闯?，提高分離度有三種途徑：①增加塔板數(shù)。方法之一是增加柱長,，但這樣會延長保留時間,、增加柱壓。液相色譜儀更好的方法是降低塔板高度,，提高柱效,。②增加選擇性。當α＝1時,，R=0,，無論柱效有多高，組分也不可能分離,。一般可以采取以下措施來改變選擇性：a.改變流動相的組成及PH值；b.改變柱溫,；c.改變固定相。③改變?nèi)萘恳蜃?。這常常是提高分離度的zui容易方法,，可以通過調(diào)節(jié)流動相的組成來實現(xiàn),。k2趨于0時，R也趨于0,；k2增大，R也增大,。但k2 不能太大,，否則不但分離時間延長，而且峰形變寬,，會影響分離度和檢測靈敏度,。一般k2 在1～10范圍內(nèi),，為2～5,，窄徑柱可更小些。
液相色譜儀分配系數(shù)與組分,、流動相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),，也與溫度,、壓力有關(guān),。在不同的色譜分離機制中,，K有不同的概念：吸附色譜法為吸附系數(shù)，離子交換色譜法為選擇性系數(shù)（或稱交換系數(shù)）,，液相色譜儀凝膠色譜法為滲透參數(shù),。但一般情況可用分配系數(shù)來表示。
在條件（流動相,、固定相、溫度和壓力等）一定,，樣品濃度很低時（Cs 、Cm很?。r,，K只取決于組分的性質(zhì),，而與濃度無關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,，在這種條件下,，得到的色譜峰為正常峰,；在許多情況下,，隨著濃度的增大，K減少,，這時色譜峰為拖尾峰；而有時隨著溶質(zhì)濃度的增大,，K也增大,，這時色譜峰為前延峰,。因此,，只有盡可能較少進樣量，使組份在柱內(nèi)濃度降低,，K恒定時,，才能獲得正常峰,。
液相色譜儀在同一色譜條件下,，樣品中K值大的組份在固定相中滯留時間長，后流出色譜柱,；K值小的組份則滯留時間短,，先流出色譜柱,。混合物中各組份的分配系數(shù)相差越大,，越容易分離,，因此,，混合物中各組份的分配系數(shù)不同是色譜分離的前提,。在HPLC中,，固定相確定后,，K主要受流動相的性質(zhì)影響,。液相色譜儀實踐中主要靠調(diào)整流動相的組成配比及PH值,，以獲得組分間的分配系數(shù)差異及適宜的保留時間,，達到分離的目的,。
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