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你知道嗎？

我國(guó)每年約有30000兒童因藥物性致聾陷入無(wú)聲世界,，其中因抗生素使用不當(dāng)致聾占了約一半,。近年研究還發(fā)現(xiàn)，我國(guó)藥源性耳聾患者中50%與遺傳因素有關(guān),，而且屬“母系遺傳”,，有家族史的患者應(yīng)禁用氨基糖苷類(lèi)藥物。

氨基糖苷類(lèi)抗生素藥

因價(jià)格低廉,、抗菌譜廣等特點(diǎn),，也應(yīng)用于獸用藥殺菌以促進(jìn)家chu生長(zhǎng)。此類(lèi)抗生素由2個(gè)或多個(gè)氨基糖基團(tuán)通過(guò)糖苷和氨基環(huán)多醇鍵合而成,，極性大,，易溶于水，脂溶性差，人體和禽畜的胃腸道不易吸收,，通過(guò)肌肉注射后大部分以原藥經(jīng)腎排泄，通過(guò)糞肥可能遷移至土壤及周?chē)w中,，終進(jìn)入食物鏈,，對(duì)動(dòng)物和人體健康及生態(tài)系統(tǒng)構(gòu)成潛在威脅。

氨基糖苷類(lèi)抗生素藥分析檢測(cè)中的挑戰(zhàn)

由于此類(lèi)化合物極性極大,，常規(guī)色譜保留弱或無(wú)保留,，無(wú)紫外吸收或紫外吸收弱，業(yè)內(nèi)目前也沒(méi)有特別成熟穩(wěn)定且靈敏的檢測(cè)方法,。

Idea 1

對(duì)于極性化合物的檢測(cè),，一般會(huì)首先想到選用親水作用液相色譜-HILIC，理論上親水性越強(qiáng)的化合物,，在Hilic柱上被保留的時(shí)間越長(zhǎng),。市面上有兩款Hilic柱在極性化合物的保留能力方面頗受廣大科研工作者的青睞，但在進(jìn)行氨基糖苷類(lèi)抗生素化合物分析檢測(cè)時(shí),，因基質(zhì)殘留大,、穩(wěn)定性差、重現(xiàn)性不好,、靈敏度不高等原因而未受認(rèn)可,。

Idea 2

另外一個(gè)思路是在流動(dòng)相中添加七氟丁酸（HFBA）、三氟乙suan（TFA）等離子對(duì)試劑來(lái)增強(qiáng)極性化合物的保留,，GBT21323-2007《動(dòng)物組織中氨基糖苷類(lèi)藥物殘留量的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》中,，使用100mM HFBA作為流動(dòng)相，結(jié)合常規(guī)的C18柱,，對(duì)這類(lèi)化合物保留良好,。

但是，TFA,、HFBA等離子對(duì)試劑,，負(fù)離子響應(yīng)*，進(jìn)到質(zhì)譜中極易殘留且不容易洗掉,，影響其他負(fù)離子化合物的檢測(cè)靈敏度,，質(zhì)譜分析中是不建議使用離子對(duì)試劑的。另外,，國(guó)標(biāo)方法中,，進(jìn)樣量大（30μL），基質(zhì)效應(yīng)明顯,，其檢測(cè)的10種氨基糖類(lèi)抗生素LOQ分別為50ppb,、300ppb，靈敏度不高。

??檢測(cè)氨基糖苷,，賽默飛有妙招,！??

賽默飛氨基糖苷類(lèi)抗生素(AGs)檢測(cè)方法包

賽默飛采用Thermo Scientific™ Vanquish™ Binary Horizon液相系統(tǒng)與Thermo Scientific™ TSQ Fortis™三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用平臺(tái)，通過(guò)在流動(dòng)相中添加TFA和HFBA等離子對(duì)試劑,，搭配Thermo Scientific™ Acclaim™ AmG C18 氨基糖苷類(lèi)抗生素檢測(cè)的柱（可耐pH范圍0.5~10）,，來(lái)增強(qiáng)這些極性化合物的保留，再結(jié)合賽默飛離子色譜專(zhuān)li的電解再生膜抑制器技術(shù),，去掉TFA和HFBA離子,，避免污染質(zhì)譜。

Vanquish™ Binary Horizon液相系統(tǒng)與TSQ Fortis™三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用平臺(tái)

基于這樣的理念和賽默飛*的技術(shù)平臺(tái),，成功建立了快速檢測(cè)動(dòng)物源食品中14種氨基糖苷類(lèi)抗生素殘留的方法（潮霉素,、阿米卡星、安普霉素,、巴龍霉素,、卡那霉素、鏈霉素,、奈替米星,、慶大霉素、大觀霉素,、雙氫鏈霉素,、妥布霉素、新霉素,、西索米星,、依替米星）。

Acclaim™ AmG C18 氨基糖苷類(lèi)抗生素檢測(cè)的柱

樣品前處理方式與國(guó)標(biāo)GBT21323-2007一致,，21min內(nèi)獲得良好的分離（國(guó)標(biāo)35 min）,，靈敏度滿足國(guó)標(biāo)要求，LOQ均≤20ppb（進(jìn)樣量5μL）且連續(xù)6針的RSD均＜14%,，連續(xù)進(jìn)50針豬肉基質(zhì)樣品后,，保留時(shí)間精密度和峰面積重復(fù)性良好，RTs偏差≤±0.03min,，各化合物50ppb的峰面積重復(fù)性均＜11%,，本方案快速靈敏、可靠穩(wěn)定,。

電解再生膜抑制器

部分實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)展示

14種氨基糖苷類(lèi)抗生素在21min內(nèi)實(shí)現(xiàn)良好保留和分離,。

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抑制器原理小貼士

在下圖抑制器原理圖中，兩邊是選擇性透過(guò)膜,，中間為流動(dòng)相通道,，通過(guò)電解水作用,，在陰極產(chǎn)生OH?置換出流動(dòng)相中的TFA?和HFBA?，直接從陽(yáng)極排到廢液,。

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參考文獻(xiàn)

徐媛,，陳達(dá)，鐘新林,，徐牛生,，LC-MSMS結(jié)合離子色譜電解再生膜抑制器技術(shù)快速檢測(cè)動(dòng)物源食品中14種氨基糖苷類(lèi)抗生素殘留