糖基化修飾是生命活動中zui廣泛,、zui重要的蛋白質(zhì)翻譯 后修飾之一,，不僅影響著蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象、生物活 性,、運輸和定位,，而且在分子識別、細(xì)胞通信,、信號轉(zhuǎn) 導(dǎo)等特定生物過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用,。糖蛋白根 據(jù)其糖鏈結(jié)構(gòu)及糖基化位點主要有N-糖蛋白與O-糖蛋白 兩大類。據(jù)推斷,，有超過50%的蛋白質(zhì)都發(fā)生了糖基化修 飾,，但由于糖基化的高度復(fù)雜性，絕大多數(shù)糖蛋白尚未 被發(fā)現(xiàn),，現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫中只有約10%的蛋白質(zhì)被注釋為糖蛋 白[1],。
糖鏈的組成與結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，糖鏈為非模板 合成且呈二維結(jié)構(gòu),，糖苷鍵連接位置和構(gòu)象的不同都會 形成差異的精細(xì)結(jié)構(gòu),。據(jù)報道，僅僅由6 個不同單糖組成 的寡糖鏈,，其結(jié)構(gòu)就可能達(dá)到驚人的1012種[2],。其次，當(dāng)組 成與結(jié)構(gòu)各異的糖鏈連接在蛋白質(zhì)上形成糖蛋白時,，又 構(gòu)成微觀不均一性,，即糖基化位點上糖鏈結(jié)構(gòu)多樣化的 問題,，一個蛋白可能存在多個糖基化位點，而每個位點 上又可能存在多種結(jié)構(gòu)的糖鏈[3],。 隨著以單抗為代表的糖蛋白藥物的開發(fā),，質(zhì)譜已廣泛應(yīng) 用于糖基化解析，通常先利用酶切或化學(xué)手段將糖鏈從 糖蛋白釋放,，再分別進(jìn)行糖基化位點的鑒定和糖鏈結(jié)構(gòu) 的解析[4],。然而針對完整糖肽的解析，目前尚無成熟技 術(shù),。本文利用新一代組合型質(zhì)譜LTQ-Orbitrap Elite具有的 HCD/ETD“雙碎裂模式”,，解析一種復(fù)雜糖蛋白的完整糖 肽，利用Byonic與SimGlycan軟件解析,，成功發(fā)現(xiàn)2個N- 糖基化位點,，16個O-糖基化位點，83種位點特異性糖鏈組 成與結(jié)構(gòu)信息,，在未脫糖狀態(tài)下使蛋白序列覆蓋度高達(dá) 92.1%,。
使用儀器：LTQ-Orbitrap Elite組合型高分辨質(zhì)譜儀
提供商 |
賽默飛色譜及質(zhì)譜 | 下載次數(shù) |
23次 |
資料大小 |
1023.1KB | 資料類型 |
PDF 文件 |
資料圖片 |
-- | 瀏覽次數(shù) |
766次 |
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
17
立即詢價
您提交后,，專屬客服將第一時間為您服務(wù)