磷脂酶A2（phospholipase A2,，PLA2）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2 位脂酰基水解酶,，廣泛存在于動植物組織,、細菌、細胞核分泌物中,，參與脂肪消化,，精子成熟、細胞信號傳遞,、脂質(zhì)過氧化修復(fù),、宿主反應(yīng)等生理過程，在控制體內(nèi)磷脂類物質(zhì)平衡,、調(diào)節(jié)機體新陳代謝,、參與疾病的病理進程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。

測定原理：

磷脂酶A2 作用于 2-硫代十六酰乙基磷酸dan堿（HEPC）產(chǎn)生游離巰基,，與DTNB 反應(yīng)生成黃色物質(zhì),，在 412nm 處有特征吸收峰。

磷脂酶A2試劑盒   脂肪酸系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑三：液體×5 瓶,，-20℃避光保存,。臨用前根據(jù)用量每瓶加入 4.5mL 試劑二充分混勻；用不完的試劑分裝后-20℃保存,，禁止反復(fù)凍融,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

自備儀器和用品：

天平、超速冷凍離心機,、研缽,、可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿,。

樣品處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g,，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃,，10000g 離心 5min,，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min,，棄上清,，取沉淀溶于 1mL 試劑一。

2. 細胞：按照細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL提取液）,，冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w,，超聲 3 秒,，間隔 7 秒，總時間 3min）,；然后于 4℃,，10000g離心 5min，取全部上清于 4℃,、100000g 離心 30min,，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一,。

3. 血清：直接測定。

測定操作：

計算公式：

1. 按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC 產(chǎn)生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位,。

PLA2 活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（e×d）×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 73.53×△A÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC 產(chǎn)生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位,。

PLA2 活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（e×d）×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 73.53×△A÷W

3. 細胞數(shù)量計算

酶活性定義：每 104 個細胞每分鐘水解HEPC 產(chǎn)生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。

PLA2 活性（nmol/min/10⁴ cell）= △A÷（e×d）×V 反總÷（V 樣×細胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

= 73.53×△A÷細胞數(shù)量

4 按照液體體積計算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC 產(chǎn)生 1nmol 游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位,。

PLA2 活性（nmol/min/mL）= △A÷（e×d）×V 反總÷V 樣÷T

= 73.53×△A

e：TNB 消光系數(shù),，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑,，1cm,；V 反總：反應(yīng)總體積，1mL,；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積,，0.1mL；W：樣本質(zhì)量,，g,；V 樣總：加入提取液體積，1mL,；

T：反應(yīng)時間,，10min

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