磷脂酶C（ Phospholipases C,，PLC ）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

磷脂酶C（EC 3.1.4.3）是一種水解甘油磷酸酯 C3 位點(diǎn)甘油磷酸酯鍵的脂類水解酶,，廣泛存在于微生物及動植物的組織和細(xì)胞中，在細(xì)胞代謝,、細(xì)胞傳遞,、生長發(fā)育等方面具有重要作用。

測定原理：

磷脂酶C 催化水解NPPC 產(chǎn)生對硝基ben酚,，在 410nm 處有特征吸收峰,。

磷脂酶C試劑盒   脂肪酸系列-常備現(xiàn)貨

組成：

自備儀器和用品：

天平、研缽、超速冷凍離心機(jī),、可見分光光度計,、1 ml 玻璃比色皿,、恒溫水浴鍋。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

酶液提?。?/span>

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g,，加入 1ml 提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 5min,，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min,，棄上清,，取沉淀溶于 1ml 試劑一,。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w,，超聲 3 秒,，間隔 7 秒，總時間 3min）,；然后于 4℃，10000g離心 5min,，取全部上清于 4℃,、100000g 離心 30min，棄上清,，取沉淀溶于 1ml 試劑一,。

3. 血清：直接測定。

測定操作：

酶活計算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0191x - 0.0103,，R2 = 0.9991

1. 按照蛋白濃度計算

酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/mg prot）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計算

酶活性定義：每克組織每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚所需的酶量為一個酶活力單位,。

PLC 活性（nmol/min/g 鮮重）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活性定義：每 10⁴ 個細(xì)胞每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚所需的酶量為一個酶活力單位,。

PLC 活性（nmol/min/10⁴ cell）=（△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) ÷T

= 17.45×（△A+0.0103）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計算

酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解NPPC 產(chǎn)生 1nmol 對硝基ben酚所需的酶量為一個酶活力單位。

PLC 活性（nmol/min/ml）= （△A+0.0103）÷ 0.0191×V 反總÷V 樣÷T

= 17.45×（△A+0.0103）

V 反總：反應(yīng)總體積,，1ml,；V 樣：加入樣本體積，0.1ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1ml,；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml,；W：樣本質(zhì)量,，g；T：反應(yīng)時間,，30min

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