磷脂酶D（ Phospholipases D,，PLD ）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

磷脂酶 D（EC3.1.4.4）即磷脂酰dan堿水解酶,，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱,，廣泛存在于高等動(dòng)植物和細(xì)菌等多種生物體中,，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo),、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能,。

測(cè)定原理：

磷脂酶D 催化水解磷脂酰dan堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和dan堿,，dan堿在dan堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫在過(guò)氧化氫酶的作用下將 4-氨基安替bi林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),，在 500nm 處有特征吸收峰,。

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組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存,。臨用前加 3ml 無(wú)水乙醇充分溶解,；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

天平,、研缽、超速冷凍離心機(jī),、可見(jiàn)分光光度計(jì),、1 ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋,，無(wú)水乙醇,。

酶液提取

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g,，加入 1ml 提取液）加入提取液,，冰浴勻漿后于 4℃,，10000g 離心 5min,，取全部上清于 4℃,、100000g 離心 30min,，棄上清,，取沉淀溶于 1ml 試劑一。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1ml提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w,，超聲 3 秒，間隔 7 秒,，總時(shí)間 3min）,；然后于 4℃，10000g離心 5min,，取全部上清于 4℃,、100000g 離心 30min，棄上清,，取沉淀溶于 1ml 試劑一,。

3. 血清：直接測(cè)定。

測(cè)定操作

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