酸性木聚糖酶（Acidic Xylanase，ACX）測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生,，能催化水解木聚糖,，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖,，降低釀造中物料的粘度,，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖,，促進營養(yǎng)物質的吸收利用,，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中，ACX 一般分離自耐酸的真菌,，細菌及部分霉菌,。

測定原理：

ACX 在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進一步在沸水浴條件下與 3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應,，在 540nm 處有特征吸收峰,，反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應液在 540nm 吸光值增加速率,，可計算ACX 活力,。

酸性木聚糖酶測定試劑盒   糖代謝系列

組成：

試劑一：液體 12ml×1 瓶，4℃避光保存,。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀,，可 60℃加熱溶解后使用）

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機,、恒溫水浴鍋,，可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿和蒸餾水,。

粗酶提?。?/span>

1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于 8000g,，4℃，離心 15min,，取上清，作為待測樣品,。

2. 酶干粉：稱約 0.1mg,，加 1ml 緩沖液溶解待測。

3. 組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml緩沖液）進行冰浴勻漿,，然后 8000g，4℃,，離心 10min,，取上清待測。

測定操作表：

ACX 計算公式：

標準曲線：y = 2.5554x - 0.002 ,，R² = 0.9983

1. 按液體體積活力計算：

酶活定義：50℃,，pH4.8 條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位,。

ACX 活力（nmol/min/ml）= （ΔA+0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶

= 435× (ΔA+0.002)

2. 按蛋白濃度計算：

酶活定義：50℃,，pH4.8 條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位,。

ACX 活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶÷Cpr

= 435×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr

3. 按鮮重計算：

酶活定義：50℃,，pH4.8 條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生 1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位,。

ACX 活力（nmol/min/g 鮮重）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×10⁶÷W

= 435×(ΔA +0.002 ) ÷W

150：木糖的分子量,；T：反應時間，30min,；稀釋倍數(shù)=V 反總÷V 樣=1000µL÷200µL=5,；

10⁶：轉化因子,，即 1mg/ml=10⁶ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/ml,；W：樣本質量，g,。

注意事項:

1. 吸光度變化應該控制在 0.01~0.8 之間,，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變,。

2. 試劑盒 2-8℃保存,，保質期 3 個月，建議盡快使用,。

酸性木聚糖酶測定試劑盒   糖代謝系列