總多糖含量測定試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

多糖是生物體中廣泛存在的物質(zhì),，是一類由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接而成的天然高分子多聚物,，它是生物體內(nèi)重要的生物大分子,，是維持生命活動正常運轉(zhuǎn)的基本物質(zhì)之一。

測定原理：

利用水提醇沉法提取總多糖,，ben酚-硫酸法測定總多糖含量,。

總多糖含量測定試劑盒 糖代謝系列-常備現(xiàn)貨

組成：

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機,、可調(diào)式移液器、1ml 玻璃比色皿,、無水乙醇,、濃硫酸、蒸餾水,、水浴鍋,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

總多糖提取：

樣本烘干粉碎,，稱取約 0.05g 樣本,，加入 1ml 水，充分勻漿,。100℃水浴提取 2h（必須蓋緊蓋子防止水分流失）,，冷卻后 10000g 離心 10min，取上清,。吸取 0.2ml 上清,，慢慢加入 0.8ml 無水乙醇，混勻后 4℃靜置過夜,，10000g 離心 10min,，棄上清，沉淀中加入 1ml 水,，充分混勻溶解沉淀,。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 490nm,，蒸餾水調(diào)零,。

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2、吸取 400µl 上清,，加入 200µl 試劑一和 1ml 濃硫酸,，混勻后 90℃水浴 20min，流水冷卻,。取 1ml 加入比色皿,，于 490nm 下測定吸光值A。

總多糖含量計算：

以葡萄糖作為對照品,，標準條件下測定回歸方程為y = 15.962x - 0.0037,，R² = 0.9973，x 為葡萄糖含量（mg/ml）,，y 為吸光值,。

總多糖含量(μg/g 干重)= (A +0.0037)÷ 15.962×V1÷V2×V3÷W×1000

=313.24×(A+0.0037) ÷W

V1：醇沉后重新溶解后的體積,，1ml,；V2：進行醇沉的體積，0.2ml,；V3,，提取時加入水的體積，1ml,；W：樣本質(zhì)量,，g；1000,，mg 到μg 的換算系數(shù),。

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