纖維素（CLL）含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

纖維素是由葡萄糖組成的大分子多糖,，通常與半纖維素、果膠和木質(zhì)素結(jié)合在一起,，是植物細胞壁的主要結(jié)構(gòu)成分,。纖維素是一種重要的膳食纖維，是自然界中分布zui廣,、含量最多的一種多糖,。

測定原理：

纖維素為β－葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱能分解成β－葡萄糖,。β－葡萄糖在強酸作用下,，可脫水生成β－糠醛類化合物。β－糠醛類化合物與蒽酮脫水縮合,，生成糠醛衍生物,。顏色的深淺可間接定量測定纖維素含量。

纖維素（CLL）含量試劑盒  糖代謝系列

組成：

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、1ml 玻璃比色皿、80％乙醇,、丙酮,、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水,。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

樣品的前處理：

1,、細胞壁的提取：取約 0.3g 樣本,，加入 1ml 80％乙醇,，室溫快速勻漿，90℃水浴 20min（加熱過程中EP管可能爆開,，建議用膠帶封口或使用防爆 EP 管）,，冷卻至室溫，6000g 25℃離心 10min,，棄上清,。沉淀加入 1.5ml80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩 2min 左右，6000g 25℃離心 10min,，棄上清即可）,，沉淀即為粗細胞壁，加入 1ml 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時,，6000g 25℃離心 10min,，棄上清，將沉淀干燥,，稱重得細胞壁物質(zhì)（CWM）,。

2、纖維素的提?。悍Q取烘干的CWM 約 5mg,，加入 0.5ml 蒸餾水充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅硬，可先研碎后再加入 0.5ml 蒸餾水勻漿,，或者用勻漿器勻漿),，勻漿液轉(zhuǎn)移至EP 管中，用蒸餾水定容至 0.5ml,，置于冰水浴中,，緩慢加入 0.75ml 濃硫酸，混勻,，冰水浴中靜置 30min,。8000g 4℃離心 10min，取上清液,，用蒸餾水稀釋 20 倍后待測,。

測定步驟：

1,、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 620nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度,。

3,、工作液的配制：在試劑二中加入 4ml 試劑三，充分溶解,，如較難溶解,，可加熱攪拌；用不完的試劑 4℃

保存一周,；

4,、加樣表（在EP 管中反應(yīng)）：

混勻，置 95 度水浴中 10min（蓋緊,，以防止水分散失）,，冷卻至室溫后，于 620nm 處,，分別讀取空白管和測定管吸光值，ΔA=A 測定管-A 空白管,。

注意：

1,、空白管只要做一管。

2,、由于濃硫酸具有強腐蝕性,，請謹(jǐn)慎操作。

纖維素含量計算：

1,、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 7.875x - 0.0043,；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為吸光值,。

2,、按樣本質(zhì)量計算：

纖維素（mg /g 干重）= [(ΔA＋0.0043) ÷7.875×V1]÷（W×V1÷V2）×20=3.17×(ΔA＋0.0043) ÷W。

V1：加入樣本體積,，0.3ml,；V2：加入提取液體積，1.25ml,；W：樣本干重,，約 5×10^-3g；20：樣本稀釋倍數(shù),。

注意：zui低檢測限為1mg/g 干重或 10ng/ mg prot

纖維素（CLL）含量試劑盒  糖代謝系列