α-葡萄糖苷酶（α-Glucosidase, α-GC）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物,、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,，催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,，不僅與細胞壁的松弛或加固有關，而且與細胞識別和一些信號分子產生密切相關,。

測定原理：

α-GC 分解對-硝基苯-α-D 吡喃葡萄糖苷生成對-硝基ben酚,，后者在 400nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GC 活性,。

α-葡萄糖苷酶試劑盒 糖代謝系列-常備現貨

組成：

試劑一：粉劑×2 瓶,，-20℃保存；臨用前每瓶加入 10ml 蒸餾水,，充分溶解備用,；用不完的試劑仍-20℃保存。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機,、水浴鍋、可調式移液器,、1ml 玻璃比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。

粗酶液提?。?/span>

1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內,，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；15000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

2,、組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液）,，進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

測定步驟：

1,、分光光度計預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 400nm，蒸餾水調零,。

2,、加樣表

充分混勻，放入 37℃準確水浴 30min 后,，立即放入 95℃水浴 5min（蓋緊,，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）,，8000g,，4℃，離心 5min,，取上清液

充分混勻,，室溫靜置 2min 后， 400nm 處測定吸光值A,，計算ΔA=A 測定管-A 對照管,。每個測定管需設一個對照管。

α-GC 活力計算：

標準條件下測定的回歸方程為y =0.00543x -0.0027,；x 為標準品濃度（nmol/ml）,，y 為吸光值。

（1） 按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘產生 1nmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位,。

α-GC 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反總]÷(V 樣×Cpr)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr

需要另外測定,，建議使用本公司BCA 蛋白質含量測定試劑盒,。

（2） 按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g 組織每分鐘產生 1nmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位。

α-GC 活力(nmol/min /g 鮮重)＝[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘產生 1nmol 對-硝基ben酚定義為一個酶活力單位,。

α-GC 活力(nmol/min /10⁴ cell)=[(ΔA+0.0027) ÷0.00543×V 反總]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.123×(ΔA +0.0027)

V 反總：反應體系總體積,，1ml；V 樣：加入反應體系中樣本體積,，0.1ml,；V 樣總：加入提取液體積，1ml,；

Cpr：樣本蛋白質濃度,，mg/ml；W：樣本質量,，g,； 500：細胞或細菌總數，500 萬,；T：反應時間,，30min。

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