β-1,3 葡聚糖酶（β-1,3-glucanase,，β-1,3-GA）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化β-1,3-葡萄糖苷鍵水解,。在植物染病或處于其他逆境條件下,，可誘導細胞大量合成β-1,3-GA，因此β-1,3-GA 活性測定廣泛應用于植物病理和逆境生理研究,。

測定原理：

β-1,3-GA 水解昆布多糖,，內(nèi)切β-1,3-葡萄糖苷鍵，產(chǎn)生還原末端,，通過測定還原糖生成速率來計算其酶活性,。

β-1,3葡聚糖酶試劑盒 糖代謝系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存,；臨用前加入 3ml 蒸餾水,，充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準

自備儀器和用品：

可見分光光度計,、臺式離心機,、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、1ml 玻璃比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。

粗酶液提?。?/span>

1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s，間隔 10s,，重復 30 次）,；12000g 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測,。

2、按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液）,，進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 10min,，取上清,，置冰上待測。

3,、血清（漿）樣品：直接檢測,。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 550nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、樣本測定（在 1.5ml EP 管中依次加入下列試劑）：

充分混勻,，放入 37℃水浴 60 min

充分混勻，95℃水浴 5min（蓋緊,，防止水分散失）,，流水冷卻,，550nm 處記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2,，可以用蒸餾水稀釋后測定（計算公式乘以相應稀釋倍數(shù)）,，ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需設一個對照管,。

β-1,3-GA 活性計算：

1,、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0958x -0.0192；x 為標準品濃度（mg/ml）,，y 為吸光值,。

2、血清（漿）β-1,3-GA 活力的計算

β-1,3-GA(mg/h/ml)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192)

3,、細胞、細菌和組織中β-1,3-GA 活力的計算

（1） 按蛋白濃度計算

單位的定義：每mg 組織蛋白每小時產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位,。

β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr

(2) 按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每小時產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位,。

β-1,3-GA(mg/h /g 鮮重)=[( ΔA +0.0192)÷0.09585×V1]÷(W×V1÷V2)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷W

(3) 按細菌或細胞密度計算

單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為一個酶活性單位。

β-1,3-GA(mg/h /10⁴ cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192)

V1：加入反應體系中樣本體積,，0.1ml,；V2：加入提取液體積，1ml,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/ml；W：樣本鮮重,，g,；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬,。

β-1,3葡聚糖酶試劑盒 糖代謝系列-常備現(xiàn)貨