山li醇脫氫酶（sorbitol dehydrogenase，SH）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

SH（EC 1.1.1.14）催化山li醇脫氫生成果糖,，是調(diào)控生物體內(nèi)山li醇含量的關(guān)健酶之一,。

測(cè)定原理：

SH 催化山li醇脫氫生成果糖,，同時(shí)還原 NAD⁺生成NADH，測(cè)定 340nm 吸光度增加速率可以計(jì)算 SH活性,。

山li醇脫氫酶試劑盒   糖代謝系列-常備現(xiàn)貨

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶,，4℃保存；臨用前每瓶加入 15ml 蒸餾水,，用不完的試劑仍 4℃保存,。 試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存,；臨用前每瓶加入15ml 蒸餾水,，用不完的試劑仍-20℃保存。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì),、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、1ml 石英比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。

粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),，離心后棄上清,；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴,，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復(fù) 30 次）,；8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測(cè),。

2,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液）,，進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min，取上清,，置冰上待測(cè),。

3、血清（漿）樣品：直接檢測(cè),。

測(cè)定步驟：

1,、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,，蒸餾水調(diào)零,。

2、樣本測(cè)定

混勻,，37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）準(zhǔn)確水浴 5min

將上述試劑按順序加入 1 ml 玻璃比色皿中,，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，記錄 20 秒時(shí)的初始吸光度A1 和 2分 20 秒時(shí)的吸光度A2,，計(jì)算ΔA=A2-A1,。

SH 活性計(jì)算：

1、血清（漿）SH 活力的計(jì)算

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

SH（nmol/min/ml）= [ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=1688×ΔA 2,、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 SH 活力的計(jì)算:

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

SH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1688×ΔA÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位,。

SH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=1688×ΔA÷W

（3） 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。

SH（nmol/min/10⁴ cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=3.376×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積,，1.05×10^-3 L,；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm,；d：比色皿光徑,， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間,，2 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),，500 萬(wàn)。

山li醇脫氫酶試劑盒   糖代謝系列-常備現(xiàn)貨