LPO（lipid peroxidation，LPO）含量試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

脂質(zhì)過氧化是動植物體內(nèi)活性氧(ROS)氧化生物膜的過程,，脂質(zhì)過氧化物（LPO）是脂質(zhì)過氧化過程的產(chǎn)物,，即ROS 與生物膜的磷脂、酶和膜受體相關的多不飽和脂肪酸的側(cè)鏈及核酸等大分子物質(zhì)起脂質(zhì)過氧化反應形成LPO,，使細胞膜的流動性和通透性發(fā)生改變,最終導致細胞結(jié)構(gòu)和功能的改變,。因此，LPO常被作為機體氧化應激的一種指標,，與某些疾病的病理過程,，如腫瘤、化學中毒,、感染,、炎 癥、自身免疫疾病、動脈粥樣硬化（AS）及心腦血管疾病,，以及衰老等生理過程密切相關,。

測定原理：

LPO 在酸性條件下加熱，產(chǎn)生小分子終產(chǎn)物MDA,，MDA 與硫代巴bi妥酸(thiobarbituric acid,，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物,，在 535nm 有最大吸收峰,。

LPO含量試劑盒   氧化系列-常備現(xiàn)貨

組成：

臨用前注意試劑二是否wan全溶解，如未溶解,，可以 70℃-90℃加熱,，并振蕩以促進溶解。

自備儀器和用品：

分光光度計,、水浴鍋,、臺式離心機、可調(diào)式移液器,、1ml 玻璃比色皿,、研缽、冰和蒸餾水,。

LPO 提?。?/span>

1、細菌,、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測。

2,、血清（漿）樣品：直接檢測,。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長到 535 nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、在EP 管中依次加入如下試劑

立即混勻,，95℃水浴 40min 后，流水冷卻,。3000g 離心 10min,，吸取 1ml 上清加入 1ml 玻璃比色皿，測定

535nm 下各管吸光值,，記作 A 測定和A 空白,。ΔA=A 測定-A 空白。

LPO 含量計算：

用玻璃比色皿的計算公式如下

y = 1.1446x - 0.0076,，R² = 0.9997,，x 為標準品濃度μmol/ml，y 為吸光度,。

1,、血清（漿）中 LPO 含量的計算：

LPO 含量(nmol/ ml)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 標÷V 樣×1000

=873.6×（ΔA+0.0076）

2、細菌,、細胞或動物組織中 LPO 含量計算

（1） 按照蛋白濃度計算

LPO 含量(nmol/ mg prot)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 標÷(Cpr×V 樣)×1000

=873.6×（ΔA+0.0076）÷Cpr

需要另外測定,，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。

（2） 按照樣品質(zhì)量計算

LPO 含量(nmol/g 鮮重)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 標÷(W ×V 樣÷V 樣總)×1000

=873.6×（ΔA+0.0076）÷W

(3 ) 按照細菌或細胞密度計算：

LPO 含量(nmol/10⁴)=（ΔA+0.0076）÷ 1.1446×V 標÷(500×V 樣÷V 樣總)×1000

=1.747×（ΔA+0.0076）

V 標：標準曲線中加入標品體積,，0.06ml,；V 樣：加入樣本體積，0.06ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1 ml； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/ml,；W：樣本質(zhì)量，g,；500：細胞或細菌總數(shù),，500 萬；1000,，μmol 到nmol 換算系數(shù),。

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