二胺氧化酶（Diamine Oxidase,，DAO）試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動(dòng)物（腸粘膜、肺,、肝臟,、腎臟等）、植物和微生物中,。催化多胺氧化為醛,，其活性與核酸和蛋白合成密切相關(guān)，能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和受損傷程度,。

測定原理：

DAO 催化尸胺產(chǎn)生醛和過氧化氫,，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯(lián)茴香胺生成氧化型鄰聯(lián)茴香胺,，在 460nm 處有特征吸收峰,，通過測定該波長吸光度增加速率，計(jì)算 DAO 活性,。

二胺氧化酶試劑盒   氧化系列-常備現(xiàn)貨

試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

天平,、低溫離心機(jī),、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板,、蒸餾水,。

粗酶液提取：

1,、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml

提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g,，4℃離心 20min,，取上清，置冰上待測,。

2,、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液）,，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w,，超聲 3 秒，間隔 7 秒,，總時(shí)間 3min）,；然后 10000g,， 4℃,，離心 10min，取上清置于冰上待測,。

3,、血清等液體：直接測定

測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 460nm,，蒸餾水調(diào)零。

2,、加樣表

混勻,，37℃水浴 30min，微量石英比色皿/96 孔板,，蒸餾水調(diào)零,，測定 460nm 吸光值。ΔA=A 測定-A對照,。

酶活性計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

酶活性定義：在pH7.2,，溫度為 37℃條件下，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）,。

（2） 按樣本質(zhì)量計(jì)算：

DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A460 ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 18×A460÷Cpre′ d

酶活性定義：在pH7.2,，溫度為 37℃條件下,，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量定義

為一個(gè)酶活力單位。

（3） 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

DAO 活性（nmol/min/g 鮮重）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 18×A460÷We′ d

酶活性定義：在pH7.2,，溫度為 37℃條件下,，每 10⁴ 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量

定義為一個(gè)酶活力單位。

DAO 活性（nmol/min/104cell）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 18×A460÷細(xì)胞數(shù)量e′ d

(4) 按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在pH7.2,，溫度為 37℃條件下,，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位。

DAO 活性（nmol/min/ml）=A460 ×V 反總÷V 樣÷T= 18×A460

e′ d

ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L/mmol/cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積,， 0.2ml,；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.05ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/ml,； W：樣本質(zhì)量，g,；T：反應(yīng)時(shí)間,，30min

b. 用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下

（1） 按樣本蛋白濃度計(jì)算：

酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下,，每毫克組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量為一個(gè)酶活力單位（U）,。

 （2） 按樣本質(zhì)量計(jì)算：

DAO 活性（nmol/min/mg prot）=A460 ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 36×A460÷Cpre′ d

酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下,，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量定義為一個(gè)酶活力單位,。

（3） 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：

DAO 活性（nmol/min/g 鮮重）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T= 36×A460÷We′ d

酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下,，每 10⁴ 個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量

定義為一個(gè)酶活力單位,。

 (4) 按液體體積計(jì)算

DAO 活性（nmol/min/104cell）=A460 ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T= 36×A460÷細(xì)胞數(shù)量e′ d

酶活性定義：在pH7.2，溫度為 37℃條件下,，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol H2O2 所需的酶量定

義為一個(gè)酶活力單位,。

DAO 活性（nmol/min/ml）=A460 ×V 反總÷V 樣÷T= 36×A460 e′ d

ε：氧化型鄰聯(lián)茴香胺毫摩爾消光系數(shù)：7.5 L /mmol/cm；d：96 孔板光徑,，0.5cm,；V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml,；V 樣：反應(yīng)中樣本體積,，0.05ml,；V 樣總：加入提取液體積，1ml,；Cpr：樣本蛋白濃度,，mg/ml； W：樣本質(zhì)量,，g,；T：反應(yīng)時(shí)間，30min,。

注意事項(xiàng)：

1,、如果OD 值小于 0.01，適當(dāng)加大提取用樣本量,；OD 值大于 0.8,，粗酶液可適當(dāng)稀釋，或者減少提取用樣本量,。

2,、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

二胺氧化酶試劑盒   氧化系列-常備現(xiàn)貨