單寧含量試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

單寧是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物，又稱植物多酚,。具有du特的化學(xué)性質(zhì)和多種生理活性,，如能與蛋白質(zhì)、生物堿,、多糖結(jié)合,；能與多種金屬離子發(fā)生絡(luò)合或靜電作用；具有止血,、抑制微生物,、抗過敏、抗突變,、抗腫瘤,、抗衰老等生理活性。

測定原理：

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中 NADP+和NADPH,。NADPH 通過PMS 的遞氫作用,，使氧化型噻唑藍（MTT）還原為甲瓚,，570nm 下檢測吸光值,，從而測定NADPH 含量。利用 6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH,，從而檢測NADP+含量,。

單寧含量試劑盒  氧化系列-常備現(xiàn)貨

試劑的組成和配制：

需自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水,。

單寧的提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 蒸餾水）,，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP 管中,，80℃水浴提取 30min， 8000 g,，25℃離心 10 min,，取上清液待測,。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,，調(diào)節(jié)波長至 760nm 處,，蒸餾水調(diào)零；試劑一和試劑二 37℃預(yù)熱 10min 以上,；

2,、操作表：

混勻，室溫靜置 5min：

混勻,，室溫靜置 30min,，760nm 處讀取吸光值A，ΔA=A 測定-A 對照,，對照管只要做一管,。

單寧含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 1.6418x +0.0134,；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/ml),，y 為ΔA(A 測定-A 對照)。

2,、按樣本鮮重計算：

單寧含量（mg /g 鮮重）= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷（W×V1÷V2）=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W,。

3、按樣本蛋白濃度計算：

單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr,。

V1：加入樣本體積,，0.005ml；V2：加入提取液體積,，1ml,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本鮮重,，g。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下：

1,、標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 0.8209x+0.0134,；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/ml），y 為ΔA(A 測定-A對照),。

2,、按樣本鮮重計算：

單寧含量(mg/g 鮮重)=[(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(W×V1÷V2)=1.218×(ΔA-0.0134) ÷W。

3,、按樣本蛋白濃度計算：

單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134)÷0.8209×V1]÷(V1×Cpr)=1.218×(ΔA-0.0134)÷Cpr,。

V1：加入樣本體積，0.005ml,；V2：加入提取液體積,，1ml,； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml,；W：樣本鮮重,，g。

注意：

1,、 ΔA 控制在 0.02-0.5 范圍內(nèi),，若ΔA 大于 0.5，將樣本提取上清液用蒸餾水稀釋 10 倍后檢測,，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),。

2、 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍為：0.025mg/ml-0.5mm;l,。

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