葡萄糖氧化酶（glucose oxidase,，GOD）試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

GOD（EC 1.1.3.4）廣泛存在于動物、和植物中,，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,，并產生H2O2，是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一,。

測定原理：

GOD 催化產生H2O2,，過氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替bi林偶聯酚,，生成有色化合物,，在 500 nm 有特征吸收峰，顏色深淺與 GOD 活性成線性關系,。

葡萄糖氧化酶試劑盒    氧化系列

組成：

試劑一：粉劑×1 瓶,，-20℃保存,；臨用前加入 10ml 緩沖液充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存一個月,；試劑二：粉劑×1 瓶,，-20℃保存；臨用前加入 10ml 緩沖液充分溶解待用,；用不完的試劑 4℃保存一個月,；

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋,、臺式離心機,、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板,、研缽,、冰、蒸餾水

樣本的前處理：

1,、細菌,、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清,；按照細菌或細胞數量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液）,，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W,，超聲 3s,，間隔 10s，重復 30 次）,；8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織,，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,，取上清，置冰上待測,。

2,、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1,、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 500nm，蒸餾水調零,。

2,、試劑一和試劑二的配制：參見試劑的組成和配制,。

3、煮沸樣本的準備：取 200μl 樣本至新的EP 管中,，95℃水浴 10min,，冷卻至室溫后，8000g 4℃離心 10min,，取上清作為對照管的煮沸樣本待測,。

4、測定操作表

混勻,，35℃保溫 15min 后,，于 500nm 波長處讀取吸光度。ΔA=A 測定管-A 對照管,。每個測定管需設一個對照管,。

GOD 活力單位的計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

回歸方程為y = 2.8348x - 0.0169；x 為H2O2 標準品濃度（μmol/ml）,，y 為ΔA,。

1、血清（漿）GOD 活力的計算

單位定義：每ml 血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位,。

GOD（nmol/min/ml）= (ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷V 樣÷T×1000=58.8×(ΔA+0.0169)

2,、細菌、細胞或組織GOD 活力的計算

（1） 按蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位,。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(V 樣×Cpr) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位,。

GOD（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總) ×1000÷T

=58.8×(ΔA+0.0169)÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算

單位定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/10⁴ cell）=(ΔA+0.0169) ÷2.8348×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總) ×1000÷T

=0.118×(ΔA+0.0169)

V 反總：反應體系總體積,，0.125ml,； V 樣：加入樣本體積，0.05ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1 ml；T：反應時間,，15 min,； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml,；W：樣本質量,，g；500：細菌或細胞總數,，500 萬,。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

回歸方程為y = 1.4174x - 0.0169；x 為H2O2 標準品濃度（μmol/ml）,，y 為ΔA,。

1、血清（漿）GOD 活力的計算

單位定義：每ml 血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位,。

GOD（nmol/min/ml）= (ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反總÷V 樣÷T×1000=118×(ΔA+0.0169)

2,、細菌、細胞或組織 GOD 活力的計算

（1） 按蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位,。

GOD（nmol/min/mg prot）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反總÷(V 樣×Cpr) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷Cpr

（2） 按樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位,。

GOD（nmol/min/g 鮮重）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總) ×1000÷T

=118×(ΔA+0.0169)÷W

（3） 按細菌或細胞密度計算

單位定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol H2O2 為一個酶活力單位。

GOD（nmol/min/10⁴ cell）=(ΔA+0.0169) ÷1.4174×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總) ×1000÷T

=0.235×(ΔA+0.0169)

V 反總：反應體系總體積,，0.125ml,； V 樣：加入樣本體積，0.05ml,；V 樣總：加入提取液體積,，1 ml；T：反應時間,，15 min,； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml,；W：樣本質量,，g；500：細菌或細胞總數,，500 萬,。

葡萄糖氧化酶試劑盒    氧化系列