SDS-PAGE在蛋白質(zhì)分子量測定中：應用和優(yōu)勢檢測技術(shù)服務詳情介紹

dànbáizhì分子量的測定是生命科學研究中的基本實驗步驟,，對于dànbáizhì結(jié)構(gòu)分析,、表達水平評估和純度檢測具有重要意義。其中,，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE） 是zuì常用的方法之一,，以其高效、經(jīng)濟和可重復性強的特點廣泛應用于dànbáizhì研究,。本文將介紹 SDS-PAGE 的技術(shù)原理,、實驗流程、應用場景,、優(yōu)勢及局限性，并探討其在dànbáizhì分子量測定中的重要作用,。

一,、SDS-PAGE 的技術(shù)原理

SDS-PAGE 的核心原理是基于dànbáizhì在聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率來推測其分子量。該方法利用SDS（十二烷基硫酸鈉,，Sodium Dodecyl Sulfate） 將dànbáizhì變性,，使其僅根據(jù)分子量而非電荷進行分離。

1,、 SDS 在dànbáizhì分離中的作用

（1）SDS 是一種強陰離子去污劑,，能夠與dànbáizhì的疏水區(qū)結(jié)合，使dànbáizhìwánquán變性并形成線性多肽鏈,。

（2）由于 SDS 賦予dànbáizhì均一的負電荷,，因此在電場作用下,，所有dànbáizhì僅根據(jù)其分子量大小進行遷移。

2,、 聚丙烯酰胺凝膠的分離機制

（1）凝膠濃度調(diào)控分離范圍：聚丙烯酰胺凝膠的孔徑大小取決于單體（丙烯酰胺）和交聯(lián)劑（N,N'-亞甲基雙丙烯酰胺）的比例,。低濃度凝膠適用于大分子蛋白分離，而高濃度凝膠適用于小分子蛋白分離,。

（2）dànbáizhì遷移與分子量關系：較小的dànbáizhì能更容易穿透凝膠孔隙,，因此分子量小的蛋白遷移得更遠，而分子量大的蛋白移動較慢,。

3,、 遷移率與分子量的對數(shù)關系

dànbáizhì在 SDS-PAGE 中的遷移率（Rf 值）與其分子量的對數(shù)呈負相關，即：

log(MW)=a?b×Rf

其中 MW 為蛋白分子量,，Rf 為遷移率,。因此，通過測定標準蛋白的 Rf 值,，可以繪制標準曲線,，從而估算未知蛋白的分子量。

二,、SDS-PAGEdànbáizhì分子量測定的實驗流程

1,、 凝膠制備

（1）分離凝膠（Resolving Gel）：主要用于分離dànbáizhì，濃度通常為 6%-15%,，根據(jù)dànbáizhì分子量大小選擇適當?shù)臐舛取?/p>

（2）濃縮凝膠（Stacking Gel）：濃度較低（通常為 4%-5%）,，用于提高分辨率，使dànbáizhì在進入分離凝膠前聚集成窄條帶,。

2,、 樣品處理

dànbáizhì樣品需與SDS 變性緩沖液（含 β-巰基乙醇或 DTT）混合，在 95°C 加熱 5-10 分鐘,，使dànbáizhìwánquán變性并形成均勻的負電荷,。

3、 電泳

在緩沖液（Tris-Glycine-SDS）中,，以恒壓或恒流進行電泳,，一般 100-200V 運行 1-2 小時，直到指示染料（如溴酚藍）到達凝膠底部,。

4,、 dànbáizhì染色

（1）考馬斯亮藍染色（Coomassie Brilliant Blue Staining）：常用染色方法，靈敏度約為 50-100 ng,。

（2）銀染（Silver Staining）：高靈敏度,，可檢測到 1 ng 級別的dànbáizhì。

（3）熒光染料（如 SYPRO Ruby、CyDye）：適用于定量分析和高靈敏度檢測,。

5,、 分子量計算

通過與標準蛋白 Marker 進行對比，利用標準曲線估算未知蛋白的分子量,。

三,、SDS-PAGE 在dànbáizhì分子量測定中的應用

1、 確定dànbáizhì的分子量

（1）通過 SDS-PAGE 可估算未知蛋白的表觀分子量,，用于初步鑒定,。

（2）在dànbáizhì純化后，利用 SDS-PAGE 可確認目標蛋白是否為預期分子量,。

2,、 評估蛋白純度

用于檢測蛋白純化過程中的雜質(zhì)蛋白條帶，以確保目標蛋白的純度符合實驗要求,。

3,、 監(jiān)測蛋白表達

在重組蛋白表達實驗中，SDS-PAGE 可用于比較不同誘導條件下蛋白的表達水平,，評估表達系統(tǒng)的優(yōu)化情況,。

4、 檢測蛋白翻譯后修飾

由于翻譯后修飾（如磷酸化,、糖基化）會影響蛋白的分子量,，SDS-PAGE 可用于觀察蛋白遷移率變化，提示可能的修飾發(fā)生,。

四,、SDS-PAGEdànbáizhì分子量測定的優(yōu)勢及局限性

1、 SDS-PAGE 的優(yōu)勢

（1）操作簡單,，實驗流程易于掌握,，設備成本較低。

（2）適用范圍廣,，可檢測大多數(shù)dànbáizhì,，適用于生物醫(yī)藥、蛋白組學等領域,。

（3）重復性好,，電泳結(jié)果具有較高的穩(wěn)定性，適合日常實驗室檢測,。

（4）分辨率較高，能夠清晰區(qū)分 5-250 kDa 范圍內(nèi)的dànbáizhì,。

2,、 SDS-PAGE 的局限性

（1）分子量測定的精度有限：SDS-PAGE 只能提供dànbáizhì的“表觀分子量"，受翻譯后修飾和蛋白結(jié)構(gòu)影響。

（2）無法識別蛋白序列：SDS-PAGE 只能分離蛋白,，不能提供蛋白氨基酸序列信息,，需要結(jié)合質(zhì)譜（MS）或dànbáizhì印跡（Western Blot）進行鑒定。

（3）低豐度蛋白檢測靈敏度較低：考馬斯亮藍染色檢測下限較高,，需要使用銀染或熒光染色提高靈敏度,。

（4）難以分辨相似分子量蛋白：如果兩種dànbáizhì的分子量非常接近，可能無法實現(xiàn)清晰區(qū)分,，需要更高分辨率的方法（如 2D-PAGE）,。

SDS-PAGE 作為dànbáizhì分子量測定的經(jīng)典方法，憑借其操作簡便,、成本低,、重復性好的優(yōu)勢，在生物研究和藥物開發(fā)中仍然占據(jù)重要地位,。盡管其在高精度分子量測定和翻譯后修飾分析方面存在一定局限,，但與Western Blot、LC-MS 等方法結(jié)合使用,，可以更全面地解析dànbáizhì的分子特性,。憑借zhuānyè的技術(shù)團隊和7大質(zhì)量控制檢測平臺，百泰派克生物科技為從事dànbáizhì組學研究的科研人員提供高質(zhì)量基于SDS-PAGE的dànbáizhì分子量測定服務,，獲得廣泛認可,。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務,，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，N端測序,，C端測序和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二,、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學,、靶向dànbáizhì組學,、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作,。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織,、細胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析,，分析更系統(tǒng)準確。

三,、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞,，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術(shù)先進,，填補技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞,，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化,，在臨床診斷,、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應用方向,。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率,、細胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量,。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標,。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案,，從dànbáizhì,、多肽、抗體,、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務,，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務,。公司實驗室遵循NMPA,、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證,，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設備定期計量/期間核查,，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務,，支持新藥研發(fā),、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務,；

2.獲國家CNAS實驗室認可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學,、多肽組學,、代謝組學、生物藥物表征,、單細胞分析,、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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