蛋白質(zhì)分子量測定：你應(yīng)該遵循的10個步驟（二）檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

dànbáizhì分子量（Molecular Weight, MW）是揭示其結(jié)構(gòu)、功能和復(fù)合物組裝狀態(tài)的重要參數(shù),。無論是確認(rèn)重組蛋白表達(dá)是否正確,，還是驗(yàn)證蛋白復(fù)合體的亞基組成，準(zhǔn)確的分子量測定都是關(guān)鍵步驟,。本文將系統(tǒng)梳理dànbáizhì分子量測定的10個核心步驟，幫助科研人員優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計,，提高數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性,。

dìyī步：明確測定目的與蛋白特性

不同實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄈ珧?yàn)證表達(dá),、篩選修飾、研究相互作用）對應(yīng)不同測定策略,。建議提前了解蛋白的理論分子量、是否含有標(biāo)簽,、預(yù)期的聚集狀態(tài)，以及是否可能存在糖基化,、磷酸化等修飾,。

第二步：選擇合適的測定方法

常見dànbáizhì分子量測定方法包括：

• SDS-PAGE：基于電泳遷移率估算蛋白分子量,，適合初篩和表達(dá)檢測，但對修飾蛋白或聚合體存在一定誤差,。

• 凝膠過濾色譜（SEC）：適用于分析蛋白的聚集狀態(tài)或復(fù)合物組成，若結(jié)合多角度光散射（MALS）可提高分子量評估準(zhǔn)確性,。

• 質(zhì)譜法（MS）：具備高靈敏度和高分辨率,，適用于jīngquè測定蛋白分子量,，尤其在分析修飾、異構(gòu)體或復(fù)雜蛋白方面優(yōu)勢顯著,。

在百泰派克生物科技，我們提供從SDS-PAGE初篩到高分辨質(zhì)譜jīngquè測定的一站式服務(wù),，滿足不同研究需求。

第三步：蛋白樣品的準(zhǔn)備與純化

高純度的蛋白樣品是jīngzhǔn測定的前提。建議采用Ni-NTA親和純化,、SEC等方式去除雜蛋白,，避免影響測定結(jié)果,。對于質(zhì)譜分析，需進(jìn)一步脫鹽,、去除緩沖鹽或甘油等干擾成分。

第四步：估算理論分子量

使用ExPASy ProtParam等在線工具,，根據(jù)dànbáizhì氨基酸序列快速計算理論分子量（考慮標(biāo)簽與信號肽）,。此值將作為實(shí)驗(yàn)結(jié)果的參照,。

第五步：驗(yàn)證蛋白是否為單體

對于功能相關(guān)研究，判斷蛋白是否以單體或復(fù)合物存在至關(guān)重要,。可通過原位質(zhì)譜,、SEC-MALS 或冷凍電鏡數(shù)據(jù)進(jìn)行驗(yàn)證,。

第六步：選擇適配的質(zhì)譜模式

• ESI-MS（電噴霧質(zhì)譜）：適合大分子分析,，靈敏度高。

• MALDI-TOF MS：適合高通量篩查,，特別是在蛋白修飾篩查中應(yīng)用廣泛。

不同模式對樣品濃度,、緩沖體系,、帶電狀態(tài)有不同要求,，建議根據(jù)蛋白特性調(diào)整上機(jī)參數(shù)。

第七步：優(yōu)化儀器參數(shù)與上樣策略

控制進(jìn)樣流速與濃度,，避免多聚體干擾

• 對于LC-MS,，使用低鹽緩沖體系,，適配LC柱類型

• 對于MALDI,，選用合適的基質(zhì)（如sinapinic acid）增強(qiáng)信號

第八步：數(shù)據(jù)解析與分子量計算

使用zhuānyè軟件（如BioPharma Finder、MaxQuant,、FlexAnalysis）進(jìn)行譜圖分析。對照理論分子量,，判斷是否存在修飾,、降解,、剪切等現(xiàn)象。

第九步：結(jié)果驗(yàn)證與交叉驗(yàn)證

建議使用兩種以上方法進(jìn)行交叉驗(yàn)證（如SDS-PAGE結(jié)合質(zhì)譜）,，提高dànbáizhì分子量測定數(shù)據(jù)可靠性。特別是在新蛋白表達(dá),、結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究中尤為重要,。

第十步：歸檔與數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化

將實(shí)驗(yàn)流程,、參數(shù)設(shè)定、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)和分析結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化歸檔,，不僅便于后期重復(fù)實(shí)驗(yàn)，也有利于成果發(fā)表與zhuānlì申請,。

科學(xué),、jīngzhǔn,、可復(fù)現(xiàn)是關(guān)鍵，dànbáizhì分子量測定不僅是一個技術(shù)過程,，更關(guān)乎研究的可靠性和可重復(fù)性。從實(shí)驗(yàn)設(shè)計到數(shù)據(jù)解讀,，每一步都值得嚴(yán)謹(jǐn)對待,。在百泰派克生物科技,，我們?nèi)诤细叻直尜|(zhì)譜平臺（如Orbitrap,、Q-TOF）與zhuānyè數(shù)據(jù)分析團(tuán)隊(duì)，為您提供高準(zhǔn)確度的dànbáizhì分子量測定服務(wù),，支持從基礎(chǔ)研究到新藥開發(fā)的多維應(yīng)用。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一,、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù),，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,，N端測序,，C端測序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),，對蛋白序列進(jìn)行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二,、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外,，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織,、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確,。

三,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)先進(jìn),，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題,。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白,。

2.分析數(shù)量大,，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高,，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷,、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向,。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等,。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案,。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別,。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量,。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案,，深入挖掘未知的靶標(biāo),。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì,、多肽,、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征,，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH,、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,，設(shè)備定期計量/期間核查,，軟件審計追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā),、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù),；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué),、代謝組學(xué),、生物藥物表征,、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式,、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

蛋白質(zhì)分子量測定：你應(yīng)該遵循的10個步驟（二）檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹