蛋白質(zhì)N端測(cè)不出來(lái),？2大常見問(wèn)題+解決方案，快收藏,！檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì組學(xué)研究中,，N端測(cè)序?qū)τ诮馕鰀ànbáizhì起始位置、翻譯后修飾（PTMs）,、信號(hào)肽剪切以及降解路徑等生物學(xué)問(wèn)題具有重要意義,。然而，很多科研人員在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中常常遇到這樣一個(gè)令人頭疼的現(xiàn)象：dànbáizhìN端怎么也測(cè)不出來(lái),！

本文將從機(jī)制出發(fā),，拆解兩個(gè)zuì常見的技術(shù)瓶頸，并提供切實(shí)可行的解決方案,，助力你提升N端檢出率,。如果你也在做蛋白修飾、蛋白降解或是抗體驗(yàn)證的相關(guān)項(xiàng)目,，這篇文章值得收藏,。

問(wèn)題一：dànbáizhìN端被阻斷，質(zhì)譜無(wú)法識(shí)別

1,、背后原因：翻譯后修飾掩蓋N端

在真核細(xì)胞中,，dànbáizhì翻譯完成后，N端常常會(huì)經(jīng)歷一系列翻譯后修飾,，例如：

（1）N端乙?；∟-terminal acetylation）

（2）甲酰化（Formylation）

（3）信號(hào)肽或起始jiǎliúānsuān（Met）剪切

這些修飾會(huì)使N端的游離氨基失活,，從而影響Edman降解或質(zhì)譜對(duì)真實(shí)N端的識(shí)別,，導(dǎo)致信號(hào)缺失或誤判。

2,、解決方案：靶向性N端富集技術(shù)

為了提高檢測(cè)靈敏度,，當(dāng)前主流方案是采用專一性N端標(biāo)記和富集策略，如：

（1）TAILS（Terminal Amine Isotopic Labeling of Substrates）

（2）COFRADIC（Combined Fractional Diagonal Chromatography）

（3）N-terminomics專用試劑盒或標(biāo)簽技術(shù)

這些方法通過(guò)封閉內(nèi)部肽段的氨基,，僅對(duì)真實(shí)N端進(jìn)行選擇性標(biāo)記與富集，從而顯著提升檢測(cè)信號(hào)和準(zhǔn)確性,。在百泰派克生物科技,，我們已建立成熟的TAILS + 高分辨質(zhì)譜聯(lián)合平臺(tái)，適用于哺乳動(dòng)物,、酵母,、植物等多種樣本類型，幫助客戶高效解析dànbáizhìN端結(jié)構(gòu)和修飾狀態(tài),。

問(wèn)題二：蛋白酶切位點(diǎn)靠近N端,，導(dǎo)致N端肽段缺失

1、背后原因：酶切策略設(shè)計(jì)不當(dāng)

多數(shù)蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)采用yídànbáiméi（Trypsin）進(jìn)行蛋白酶解，但yíméi優(yōu)先切割K/R位點(diǎn),，而dànbáizhìN端通常不具備理想的切割條件,，容易造成：

（1）N端肽段過(guò)短（<6 aa），不被質(zhì)譜識(shí)別

（2）或N端肽段中缺乏帶電基團(tuán),，電離效率低

這也是很多樣本中N端信號(hào)“沉默"的根本原因之一,。

2、解決方案：多酶聯(lián)合切割策略

為提高N端檢測(cè)效率,，可采用：

（1）Lys-C,、Asp-N、Glu-C 等特異性蛋白酶

（2）雙酶或順序酶解（如 Lys-C + Trypsin）

（3）調(diào)整酶解緩沖液pH,，優(yōu)化切割位點(diǎn)暴露

此外,，搭配高靈敏的LC-MS/MS系統(tǒng)與高分辨質(zhì)譜掃描參數(shù)優(yōu)化，也能顯著提升N端肽段的檢測(cè)能力,。百泰派克生物科技提供靈活的多酶酶解方案,，并結(jié)合Orbitrap Exploris 480等先進(jìn)平臺(tái)進(jìn)行N端靶向檢測(cè)，為抗體藥物表征,、蛋白降解靶點(diǎn)篩選等提供強(qiáng)有力的數(shù)據(jù)支持,。

總結(jié)：蛋白N端檢測(cè)不全，是技術(shù)盲區(qū)也是優(yōu)化突破口

隨著dànbáizhì翻譯后修飾研究和靶向降解藥物開發(fā)的興起,，jīngzhǔn的N端識(shí)別將越來(lái)越重要。如果你正在規(guī)劃相關(guān)項(xiàng)目,，歡迎聯(lián)系百泰派克生物科技,，我們可為你定制zuì合適的N端序列研究方案，從前處理到數(shù)據(jù)解析全流程支持,。百泰派克生物科技為廣大客戶提供蛋白N端序列分析服務(wù),。我們的“一站式"服務(wù)能為您節(jié)省時(shí)間和精力，幫助您更高效地開展相關(guān)研究,。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一,、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù),，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析,，N端測(cè)序，C端測(cè)序和全序列分析,，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù),。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù),，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液,、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉,，PEC和和糖基化等N端修飾的影響,。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC,，提供定量dànbáizhì組學(xué),、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué),、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù),。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),，助力微量樣本蛋白組學(xué),、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,，適用于分析組織、細(xì)胞,、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確,。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量,。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題,。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白,。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞,，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高,，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq,。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷,、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景,；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾,；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小,、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量,、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四,、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的,、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別,。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,，旨在助力科研工作者尋找癌癥,、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo),。

五,、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF,，高效色譜分離技術(shù),，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì,、多肽,、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析,，到產(chǎn)品變異性和純度分析,。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì),。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù),。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA,、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,，建立了完備的質(zhì)量體系,，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,，軟件審計(jì)追蹤,，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā),、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行,。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù),；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué),、多肽組學(xué),、代謝組學(xué)、生物藥物表征,、單細(xì)胞分析,、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等,；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái),，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè),，10000+客戶的選擇,；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

蛋白質(zhì)N端測(cè)不出來(lái)？2大常見問(wèn)題+解決方案,，快收藏,！檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹