詳細介紹
?乳酸脫氫酶(LDH)活性微量法測定的原理?是通過檢測LDH催化丙酮酸還原為乳酸的過程中NADH的生成量來間接測定LDH的活性,。
具體過程如下:
?反應原理?:在LDH的作用下,NAD+被還原生成NADH,。NADH與WST-8相互作用產生顏色,,從而進行比色測定(λmax=450 nm)?。
?反應條件?:LDH將NAD還原為NADH,,NADH與WST-8相互作用產生顏色,。這個反應在冰上避光進行,各組分(如Assay Buffer、Lactate,、NAD,、WST-8、Enhancer)需在實驗前從冰箱中取出并平衡至室溫,,整個過程需避光操作?,。
?吸光度測量?:在450 nm波長下測量吸光度,吸光度與LDH活性成正比,,可以通過比色法測定LDH的活性?,。
?實驗步驟和所需設備?:
?實驗步驟?:準備工作液(1×Assay Buffer、NAD,、WST-8,、Enhancer和Lactate混合均勻),將工作液加入96孔板或微量玻璃比色皿中,,加入待測樣品,,37℃恒溫孵育一定時間后測量吸光度?。
?所需設備?:酶標儀或可見分光光度計(能測450 nm處的吸光度),、恒溫箱,、制冰機、低溫離心機,、96孔板或微量玻璃比色皿,、可調節(jié)式移液槍及槍頭、去離子水,、勻漿器(如果是組織樣本)?,。
實驗注意事項?:
?試劑保存?:各組分(如Assay Buffer、Lactate,、NAD,、WST-8、Enhancer)需在冰上避光保存,,避免反復凍融?,。
?操作注意事項?:整個實驗過程需在冰上避光進行,避免光照影響結果?,。