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實(shí)驗(yàn)室微生物細(xì)胞大小測(cè)定介紹
閱讀：89 發(fā)布時(shí)間：2025-3-17細(xì)菌群體生長(zhǎng)表現(xiàn)為細(xì)胞數(shù)目的增加或細(xì)胞物質(zhì)的增加。測(cè)定細(xì)胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(direct microscopic count),、平板菌落計(jì)數(shù)法(plate count),、光電比油法(turbidityestimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過(guò)濾法(membrane filtration)等,。測(cè)定細(xì)胞物質(zhì)的方法有細(xì)胞干重的測(cè)定,，細(xì)胞某種成分如氮的含量、RNA 和DNA 的含量測(cè)定,，代謝產(chǎn)物的測(cè)定等。
一,、微生物細(xì)胞大小的測(cè)定
1,、目鏡測(cè)微尺的校正
把目鏡的上透鏡旋下，將目鏡測(cè)微尺的刻度朝下輕輕地裝入目鏡的隔板上,，把鏡臺(tái)測(cè)微尺置于載物臺(tái)上,，刻度朝上。先用低倍鏡觀察,，對(duì)準(zhǔn)焦距,，視野中看清鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡,，使目鏡測(cè)微盡與鏡臺(tái)測(cè)微尺的刻度平行,，移動(dòng)推動(dòng)器，使兩尺重迭,，再使兩尺的“0"刻度全重合,，定位后，仔細(xì)尋找兩尺第二個(gè)全重合的刻度,，計(jì)數(shù)兩重合刻度之間目鏡測(cè)微尺的格數(shù)和鏡臺(tái)測(cè)微尺的格數(shù),。因?yàn)殓R臺(tái)測(cè)微尺的刻度每格長(zhǎng)10µm，所以由下列公式可以算出目鏡測(cè)微尺每格所代表的實(shí)際長(zhǎng)度,。
目鏡測(cè)微尺每格長(zhǎng)度
例如：目鏡測(cè)微尺5小格正好與鏡臺(tái)測(cè)微尺5小格重迭,，已知鏡臺(tái)測(cè)微尺每小格為10µm
目鏡測(cè)微尺上每小格長(zhǎng)度為。
用同樣方法分別校正在高倍鏡下和油鏡下目鏡測(cè)微尺每小格所代表的長(zhǎng)度,。
由于不同顯微鏡及附件的放大倍數(shù)不同,，因此校正目鏡測(cè)微尺必須針對(duì)特定的顯微鏡和附件（特定的物鏡、目鏡,、鏡筒長(zhǎng)度）進(jìn)行,，而且只能在該顯微鏡上重復(fù)使用,，當(dāng)更換不同顯微鏡目鏡或物鏡時(shí)，必須重新校正目鏡測(cè)微尺每一格所代表的長(zhǎng)度,?？潭戎睾?br/>
2、細(xì)胞大小的測(cè)定
⑴將酵母菌斜面制成一定濃度的菌懸液（10－2）,。
⑵取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片,。
⑶移去鏡臺(tái)測(cè)微尺，換上酵母菌水浸片,，先在低倍鏡下找到目的物,，然后在高倍鏡下用目鏡測(cè)微尺來(lái)測(cè)量酵母菌菌體的長(zhǎng)，寬各占幾格,，不足一格的部分估計(jì)到小數(shù)點(diǎn)后一位數(shù),。測(cè)出的格數(shù)乘上目鏡測(cè)微尺每格的校正值，即等于該菌的長(zhǎng)和寬,。一般測(cè)量菌體的大小要在同一個(gè)標(biāo)本片上測(cè)定10～20個(gè)菌體,，求出平均值，才能代表該菌的大小,。待測(cè)微生物需用培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體進(jìn)行測(cè)定,。
⑷同樣方法用油鏡測(cè)定枯草桿菌染色標(biāo)本的細(xì)胞大小。
二,、微生物細(xì)胞的顯微直接計(jì)數(shù)法
1,、視待測(cè)菌懸液濃度，加無(wú)菌水適量稀釋（斜面一般稀釋到10－2）,，以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度,。
2、取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊,，在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片,。
3、將酵母菌懸液搖勻,，用滴管吸取少許,，從計(jì)數(shù)板中間平臺(tái)兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣滴入一小滴，不宜過(guò)多,，讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū),，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液,。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上,，注意不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺(tái)沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后,，造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高,。然后加蓋蓋玻片,，勿使產(chǎn)生氣泡。
4,、靜置片刻,，將血球計(jì)數(shù)板置載物臺(tái)上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下觀察到計(jì)數(shù)區(qū)后,，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù),。由于活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時(shí)應(yīng)適當(dāng)關(guān)小孔徑光闌并減弱光照的強(qiáng)度,。
5,、計(jì)數(shù)時(shí)若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個(gè)大方格組成，按對(duì)角線方位,，數(shù)左上,、左下、右上,、右下的4個(gè)大方格（即100小格）的菌數(shù),。如果是25個(gè)大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個(gè)大方格外,，還需數(shù)中央1個(gè)大方格的菌數(shù)（即80個(gè)小格）。如菌體位于大方格的雙線上,，計(jì)數(shù)時(shí)則數(shù)上線不數(shù)下線,，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差,。
6,、對(duì)于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時(shí),，即可作為兩個(gè)菌體計(jì)算,。每個(gè)樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2～3次，每次數(shù)值不應(yīng)相差過(guò)大,，否則應(yīng)重新操作,，求出每一個(gè)小格中細(xì)胞平均數(shù)（N），按公式計(jì)算出每mL(g)菌懸液所含酵母菌細(xì)胞數(shù)量,。
7,、測(cè)數(shù)完畢，取下蓋玻片,，用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈,，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度,。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,，放入盒內(nèi)保存,。