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       細(xì)胞培養(yǎng)方法,，作為生命科學(xué)研究與生物醫(yī)藥領(lǐng)域的一項核心技術(shù),，其精妙之處在于能夠模擬體內(nèi)環(huán)境，為細(xì)胞提供一個適宜的生長平臺,，從而深入探索細(xì)胞的生物學(xué)特性,、疾病發(fā)生機制及藥物篩選等,。

凍存細(xì)胞接收后的處理：

1.干冰運輸，收到細(xì)胞后立即轉(zhuǎn)入-80℃冰箱短暫中轉(zhuǎn)或直接復(fù)蘇,；

2.收到細(xì)胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已經(jīng)*揮發(fā),、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯(lián)系。

復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：

1.收到細(xì)胞后,，請首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液,，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請立即拍照把圖片發(fā)給我們,。

2.75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后,，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細(xì)胞脫落,，可收集上清離心,，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。

3.建議收到當(dāng)天不要消化處理,，如果細(xì)胞長滿90%,，可選擇傳代處理。

4.如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒有反饋相關(guān)問題,，出現(xiàn)的細(xì)胞問題將不提供免費重發(fā)服務(wù),。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或鹽水清洗1-2次,；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿,，蓋好放入培養(yǎng)箱消化,；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁,，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止,；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中,。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,，時間1min左右,，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,，補加適量培養(yǎng)基。

3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,，用PBS或鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后,，顯微鏡下觀察細(xì)胞,，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化,；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞,；

④將凍存管放入程序降溫盒,，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存,。