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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：獼猴源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P013348
產(chǎn)品規(guī)格： 50次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油,。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存,。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器,、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2.為避免RNA降解,，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè),；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理,。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照,。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨(dú)存放,。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記,。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用,。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄,。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加,。
4.除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。
MBP ELISA Kit 大鼠主要性蛋白Multi-class antibodies： 48T
TCTP 翻譯控制蛋白抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Bovine IgG/PE PE標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml
TFR/CD71(Mouse transferrin receptor) ELISA Kit 小鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 96T
Phospho-NMDAR1 (Ser890) 磷化谷受體1抗體 0.1ml
Batroxobin(5H4) 巴曲霉單克隆抗體 0.2ml
TCTP 翻譯控制蛋白抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
VEGF-B(Human Vascular Endothelial cell Growth Factor B) ELISA KIT 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子BMulti-class antibodies： 48T
GHR 生長(zhǎng)受體抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Mouse Guinea pig IgG 小鼠抗豚鼠IgG 1mg
HSP gp96(Human Heat Shock Protein glycoprotein 96) ELISA Kit 人熱休克蛋白糖蛋白96 96T
RAMP3 受體活性修飾蛋白3抗體 0.2ml
phospho-Beta catenin (Tyr86) 磷化β 連環(huán)蛋白抗體 0.1ml
GHR 生長(zhǎng)受體抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit Monkey IgG/Bio 生物標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml
FRAT2 GSK-3結(jié)合蛋白FRAT2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANGEL2 ANGEL2蛋白抗體 0.2ml
IRS-3/FITC 熒光標(biāo)記胰島受體底物-3抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgM/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml
SGLT1 /FITC 熒光標(biāo)記鈉-葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)載體1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
獼猴源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒人脾臟酪（SYK）elisa檢測(cè)試劑盒
人葡萄糖（GCK）elisa檢測(cè)試劑盒
人眼小畸形關(guān)聯(lián)轉(zhuǎn)錄因子（MITF）elisa檢測(cè)試劑盒
人酪羥化（TH）elisa檢測(cè)試劑盒
人可溶性腺苷環(huán)化（sAC）elisa檢測(cè)試劑盒
人卵清蛋白特異性IgE（OVA sIgE）elisa檢測(cè)試劑盒
人內(nèi)皮特異分子1（ESM1）elisa檢測(cè)試劑盒
人Toll樣受體4（TLR4）elisa檢測(cè)試劑盒
人基質(zhì)衍生因子2樣蛋白1（SDF2L1）elisa檢測(cè)試劑盒
人紅因子（ESF）elisa檢測(cè)試劑盒
人甲狀腺抗體（TAb）elisa檢測(cè)試劑盒
人核糖核（RNASE）elisa檢測(cè)試劑盒
人血栓烷受體（TP/TXA2R）elisa檢測(cè)試劑盒
人高密度脂蛋白（HDL）elisa檢測(cè)試劑盒
人肌腱蛋白C（TNC）elisa檢測(cè)試劑盒
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