詳細(xì)介紹
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
轉(zhuǎn)基因品系馬鈴薯ATBT04-30 PCR試劑盒 | 50T | FS-L63703 |
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。?
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,,不同的樣本有不同要求,,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4)樣本保存于液氮或干冰,,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析,。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)異戊酸甲酯
鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,溶劑:1.0 mol/L HNO3)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-哌啶酸
鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:1.5 mol/L HNO3)ALKBH7 AntibodyFmoc-L-吖丁啶羧酸
銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000mg/l,溶劑:1%硫酸)CD40 Ligand (D5J9Y) Rabbit mAb2-氨基并噻唑-6-甲酸
銅標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/l,溶劑:1%硫酸)BCL9 Antibody3'-溴酮
鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml)Akt3 (E1Z3T) Rabbit mAb2,二-5-硝基三氟
鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:水)TRIM27 (D5S4O) Rabbit mAb溴-2,5-二氟
鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體:水)APC8 (D5O2D) Rabbit mAb喹啉-羧酸
鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體: 5%HCl)NLRP3 (D4D8T) Rabbit mAb酰唑
鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(100µg/mL,基體: 1%HNO3)cGAS (D1D3G) Rabbit mAb5-甲基噻唑-2-甲酸
鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.100μg/g,基體:K+ 2.2mg/L,Na+ 23mg/L,Ca2+ 39mg/L,Mg2+ 11mg/L,0.5mol/L HNO3)cGAS (D1D3G) Rabbit mAb焦酸鈉十水合物
鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:1%鹽酸)Aiolos (D1C1E) Rabbit mAb酮基布洛芬
鈷標(biāo)準(zhǔn)溶液(100(20℃)µg/mL,基體: 1%HNO3)IRF-4 (D9P5H) Rabbit mAb5--2-甲酸
鈰標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體:10%HNO3)TREX1 (D8E2O) Rabbit mAb4,5-二氟鄰二甲酸
鏑標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Smac/Diablo (D5S3R) Rabbit mAb異氧基
溴代異辛烷(標(biāo)準(zhǔn)品)β-Tubulin (D2N5G) Rabbit mAb氨基異煙酸
銪標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml)Phospho-Akt (Ser473) (D9W9U) Mouse mAb (Biotinylad)叔丁氧羰基氨基哌啶
氟離子(F-)標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑:水)YAP (D8H1X) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-硝基-5-氟甲酸甲酯
轉(zhuǎn)基因品系馬鈴薯ATBT04-30 PCR試劑盒25g500g茶多酚Cinnamate4hydroxylase
炔諾 質(zhì)量規(guī)格:>97% rethindrone
GDNF(Human glial cell linederived neurotrophic factor) ELISA KIT 人膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)子CAS號(hào):9005009 *羧化骨鈣素檢測試盒1L偽狂犬病GB抗體檢測試盒PseudorabiesvirusGEantibody
100g500g茶多酚Glucokinase
普通變形桿菌 Proteus vulgaris胰腺腺泡細(xì)胞
PAIgG/M/A ELISA Kit 大鼠抗血小板抗體IgG/M/ACAS號(hào):9005009 唾液皮質(zhì)醇檢測試盒10*1L偽狂犬病GE抗體檢測試盒HeatShockProtein90
500mg250g茶多酚Glycogen synthas
可的松(標(biāo)準(zhǔn)品) 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品 Cortisone
RANTES/CCL5(Mouse regulated on activation in rmal Tcell expressed and secreted) ELISA Kit 小鼠正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌子CAS號(hào):9004993 高密度脂蛋白載脂蛋白A1檢測試盒1L熱休克蛋白90檢測試盒circovirus
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,,而不能從無到有,憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,,一般20多bp,,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM
5.Taq酶
二,、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增,。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,,后在72℃ 保溫7min,。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,,以除去石蠟油;否則,,直接取5-10μl電泳檢測,。
檢測方法包括以下步驟:
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線;
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),,計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果,。
其中步驟(1)為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,,克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品,,并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,較佳地管家基因,,優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,,其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,較佳地為PCR克隆載體,,優(yōu)選地為TA cloning載體,所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體,。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示,。所述的等比例較佳地為1:1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1,,解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題,,提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為:待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,,目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),,計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測結(jié)果,。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因,,較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,,所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,,所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增,。