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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：森林腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P013467
產(chǎn)品規(guī)格： 50次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二,、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min,。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器,、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2.為避免RNA降解,，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理,。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照,。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨(dú)存放,。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記,。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用,。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄,。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。
4.除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
LDL-R/FITC 熒光標(biāo)記低密度脂蛋白受體抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
SSTR1/FITC 熒光標(biāo)記生長抑受體1(SSTR1)抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh AGFG2 HIV-1病毒復(fù)制結(jié)合蛋白2抗體 0.2ml
Rabbit Guinea pig IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgG 0.1ml
GPR71 G蛋白偶聯(lián)受體71抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Goat IgG/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.1ml
SSTR1/FITC 熒光標(biāo)記生長抑受體1(SSTR1)抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
sm Actinin- Alpha(Human skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit 人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白αMulti-class antibodies： 48T
MMP-14 基質(zhì)金屬蛋白-14抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh Intra Acrosomal Protein/SP10 頂端體蛋白10抗體 0.2ml
IGFBP-2 ELISA Kit 大鼠胰島樣生長因子結(jié)合蛋白2 96T
PSMD9 蛋白調(diào)解因子9抗體 0.2ml
CPA3 肥大細(xì)胞羧肽A3抗體 0.2ml
MMP-14 基質(zhì)金屬蛋白-14抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit pig IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml
GATA5 GATA結(jié)合蛋白5抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ApoER2 載脂蛋白E2受體抗體 0.1ml
IL-4/FITC 熒光標(biāo)記抗白介4抗體(人)IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit MG IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml
Proteasome 20S LMP7 /FITC 熒光標(biāo)記低分子質(zhì)量蛋白7抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
森林腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒花楸本森頓酵母種屬: Bensingtonia│sorbi分離基物: Sorbus pohuashanensis提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株培養(yǎng)基: 0013生長條件: 17℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
蘇云金芽孢桿菌種屬: Bacillus│thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
木賊鐮孢種屬: Fusariumequiseti分離基物: 花菜籽安全等級(jí): 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 轉(zhuǎn)化甾體培養(yǎng)基: 14,17生長條件: 25~28℃
肉桂色曲霉種屬: Aspergillus│cinnamomeus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0015生長條件: 28℃存儲(chǔ)條件: 真空冷凍干燥法
可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)ELISA試劑盒亞硝 CP,95%5-基吲哚 99%硬脂紅霉
可溶性脂A2(sPL-A2)ELISA試劑盒四草，二 PT2-異煙 97%精
可溶性間皮相關(guān)肽(SMRP)ELISA試劑盒偏 AR肉桂酰 97%亞精
可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)ELISA試劑盒鍺試劑 AR3-肉桂 98%亞精鹽
可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒鍺試劑 97%2-芐 99%多球殼菌,；嗜熱菌殺酵母（來源于無孢霉群）
可溶性核因子κB受體活化因子(sRANK)ELISA試劑盒高 99.99% metals basis2--5-甲 99%亞精鹽鹽
可溶性凋亡相關(guān)因子配體(sFASL)ELISA試劑盒N-基（釩試劑） AR,95%2--5-甲 97%N-甲?；?DL-精氨酰-4-鹽鹽
可溶性淀粉前體蛋白α(sAPPα)ELISA試劑盒N-基（釩試劑） 98%4-吲哚 98%栗精
可溶性蛋白185(sp185/HER-2)ELISA試劑盒焦銻 AR,99.0%2-基甲 98%精四鹽鹽;鹽精
可溶性彈性蛋白片段(sELAF)ELISA試劑盒1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 AR,90.0% 2-甲硫基-5-嘧啶-4-甲 95%D-熒光鹽，D-蟲熒光鹽
可溶性半乳糖苷結(jié)合凝集3(Lgals3)ELISA試劑盒1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 98%2--4-硝基吡啶 98%鹽替丁
可溶性白抗原G(sHLA-G)ELISA試劑盒多乙烯多 AR4-基吲哚 98%鹽雷丁(標(biāo)準(zhǔn)品)
可溶性白介7受體(sIL-7R)ELISA試劑盒檸檬二氫 AR,98.0%2--6-氟 98%熒光鈉
可溶性P選擇(sP-selectin)ELISA試劑盒氟氫化 AR,，99.0%2--N,N-二甲基乙酰 97%D-蟲熒光鈉鹽;D-熒光鈉鹽
可溶性OX40L(sOX40L)ELISA試劑盒氟氫化 CP,，98.0%4--2-三氟甲基喹啉 97%2ˊ,7ˊ-二熒光鈉鹽
可溶性E選擇(sE-selectin)ELISA試劑盒N-基硫脲 98%2--4-吡啶 95%天青I;天青B
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