儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物,。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。

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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞、血液,、細(xì)菌等很多材料,，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息,、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào),；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品,。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加,。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析,。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析,、基因表達(dá)差異分析、基因分型,。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一,、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無(wú)到有,，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min,。
3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因,，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體,，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為T(mén)A cloning載體,，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體,。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1,。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1,，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性,。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域,，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增,。
L-組氨酸MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb2-溴-6-氟甲

L-氨酸MCM2 (D7G11) XP® Rabbit mAb5-吡-2-羧酸

L-酪氨酸Presenilin 1 AntibodyN-基-哌啶酮

L-酪氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)PSD95 (7E3) Mouse mAb5-溴-2-酚

L-谷氨酸β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氟-溴吡啶

L-谷氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)異

L-谷氨酸(sigma)NUT (C52B1) Rabbit mAb2--5-并噻唑

DL-谷氨酸CD11c (3.9) Mouse mAb (APC Conjuga)2--并噻唑

肌氨酸Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb1-溴-3,二甲氧基烷

甘氨酸-DL-亮氨酸Ingrin β5 (D24A5) Rabbit mAb2',3'-異叉腺苷

L-亮氨酰甘氨酸RalBP1 (I33) Antibody5-酰基-2-甲基吡啶

蒜氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Nicastrin Antibody3,二酮

L-脯氨酸ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb環(huán)戊

DL-纈氨酸ALK (D5F3®) XP® Rabbit mAb2,5-二氟

 L-亮氨酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Tuberin/TSC2 (28A7) Rabbit mAb氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽

L-亮氨酸Histone H2A (L88A6) Mouse mAb鄰三氟肼

DL-賴(lài)氨酸CD14 (61D3) Mouse mAb (APC Conjuga)六水硝酸銩

DL-精氨酸鹽酸鹽Histone H3 (96C10) Mouse mAb2,二氟
轉(zhuǎn)基因品系水稻KMD染料法qPCR試劑盒100mg1g麗春紅2Rlaccase

雌莫司汀 質(zhì)量規(guī)格：國(guó)進(jìn)口 Estramustine 3% NaC1胰胨水發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

Bid ELISA Kit  大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白CAS號(hào)：869249胱氨檢測(cè)試盒100ml肉絳蟲(chóng)IgM抗體檢測(cè)試盒basicfibroblastgrowthfactor

500g5MG麗春紅2RATP synthase

馬錢(qián)苷;Loganin 規(guī)格： 20mg 訂購(gòu)|咨詢(xún) SK-N-BE(2) (人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

D2R(Human dopamine D2 receptor) ELISA Kit  人多胺D2受體CAS號(hào)：868144 透明質(zhì)結(jié)合蛋白2檢測(cè)試盒100ml性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)子檢測(cè)試盒FootandmouthdiseasevirusAntigen

100g5g麗春紅Smaltase

卡馬西平（標(biāo)準(zhǔn)品） 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 Carbamazepine 小鼠子宮成纖維細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

EM2(Human endomorphin2) ELISA Kit  人內(nèi)肽2CAS號(hào)：867561 巨噬細(xì)胞來(lái)源的趨化子檢測(cè)試盒100ml口蹄疫病檢測(cè)試盒BLC1;CXCL13