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服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù),。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞,、血液,、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求,，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰,，也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析,。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無(wú)到有,，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP,、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二,、操作步驟
1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
     Taq酶（2U/μl）            1μl
     DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    視PCR儀有無(wú)熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min,。
3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè),。
檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上,，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后,，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果,。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接,，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品,，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因,，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域,，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體,，優(yōu)選地為TA cloning載體,，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示,。所述的等比例較佳地為1：1,。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問(wèn)題,，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性,。
步驟(2)為：待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù),，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值,，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因,，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因,，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法,，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增,，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后,，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
瑞格非尼FXR2 Antibody對(duì)

MK-2866FEZ1 (D9R8Q) Rabbit mAb氧基酚

XTT鈉鹽PI3 Kinase p110α (C73F8) Rabbit mAb6-溴-2-并噻唑啉酮

二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)PI3 Kinase p110α (C73F8) Rabbit mAb三基基溴化

二氫獼猴桃內(nèi)酯,奇異果內(nèi)酯SMYD2 Antibody鹽酸多巴

馬西替坦;ACT064992PI3 Kinase p110γ Antibody1,二(溴甲基)

組蛋白去?；敢种苿?/font>(M 344)DR4 (D9S1R) Rabbit mAb對(duì)二

2--5-甲酰;GW 9662Cleaved Caspase-7 (Asp198) (D6H1) Rabbit mAb (PE Conjuga)二甲氧基膦?；崾宥□?/span>

2-硝基咪唑 PI3 Kinase p110α Antibody對(duì)二甲

(三氟甲基)-1H-咪唑 MLH1 (D38G9) Rabbit mAb硫辛酸

2-甲基-三氟甲基咪唑 MLH1 (D38G9) Rabbit mAb1,2-二烷

2-氨基咪唑硫酸鹽 PI3 Kinase p85 (19H8) Rabbit mAbN-基

奧當(dāng)卡替(MK-0822)PI3 Kinase p85 (19H8) Rabbit mAbN-基二

硝基兒茶酚EOMES (D8D1R) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,二-7-甲氧基喹唑啉

硝基兒茶酚MHC Class II (I-A/I-E) (M5/114.15.2) Rat mAb (FITC Conjuga)甲基基硫

曲格列酮Acetyl-Histone H3 (Lys36) (D9T5Q) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)二甲基二硫

鹽酸阿糖胞苷Tri-Methyl-Histone H3 (Lys79) Antibody天麻素

鹽酸阿糖胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品)Phospho-SRF (Ser103) Antibodyβ-羥基異戊酸
轉(zhuǎn)基因品系煙草C/F/93/08-02 PCR試劑盒GMEM培養(yǎng)基　Marcks 　100 ug

DMEM/F12培養(yǎng)基　MAP4K4 　100 ug

McCOY’S 5A培養(yǎng)基　MAPRE2 　100 ug

LEIBOVITZ’S L15培養(yǎng)基　MAP4K5 　100 ug

ISCOVE’S MDM培養(yǎng)基　MAN2B2 　100 ug

GRACE’S 昆蟲培養(yǎng)基　MAN1A2 　100 ug

胚胎干細(xì)胞（ES）基礎(chǔ)培養(yǎng)基　MAP4K3 　100 ul

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEF）*培養(yǎng)基　MANBAL 　100 ug

胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)生長(zhǎng)因子　MANEA 　100 ug

胚胎干細(xì)胞基質(zhì)膠溶液　MAML1(Mastermind-like protein 1) 　100 ug

胚胎干細(xì)胞補(bǔ)充培養(yǎng)基　MALT1 　100 ug

人體胚胎干細(xì)胞條件培養(yǎng)基　MAML3 　100 ul

人體胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)基　MAN2B2 　100 ug

小鼠胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)基　MAN1A2 　1Kit

大鼠胚胎干細(xì)胞*培養(yǎng)基　MANBAL 　100 ug

滋養(yǎng)細(xì)胞法胚胎干細(xì)胞繁殖　MANSC1 　100 ug