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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：大豆源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P013376
產(chǎn)品規(guī)格： 50次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一,、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min。 3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存,。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè),。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū),、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服,、儀器,、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2.為避免RNA降解,，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè),；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理,。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰,、陽性對(duì)照,。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時(shí)離心,。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置,；不同批號(hào)試劑不能混用,。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None,。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄,。
Phospho-LRP6 (Ser1490) /FITC 熒光標(biāo)記磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
TAK1/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh ADD1/alpha Adducin 內(nèi)收蛋白a1抗體 0.2ml
Rabbit dog IgG/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml
GPR56 蛋白偶聯(lián)受體56抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh Rabbit chicken IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗雞IgM 0.1ml
TAK1/FITC 熒光標(biāo)記轉(zhuǎn)化生長因子β活化激1抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
GM(Human Gastric Mucin) ELISA Kit 人胃粘液Multi-class antibodies： 48T
HSP70 熱休克蛋白-70抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rhesus antibody Rh MARCKS 丙蛋白激C底物Marcks抗體 0.2ml
PaCoA(Human Phosphorylated acetyl CoA) ELISA Kit 人磷化乙酰A 96T
RACGAP1 Rho GTP激活蛋白GAP抗體 0.2ml
Claudin 5 緊密連接蛋白5抗體 0.1ml
HSP70 熱休克蛋白-70抗體Multi-class antibodies： 0.1ml
Rabbit Monkey IgM/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1ml
phospho-GAB2 (Ser159) 磷化接頭蛋白Gab2抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ANKRD26 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白26抗體 0.2ml
Integrin AlphaE2/CD103 /FITC 熒光標(biāo)記整合αE2抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit human IgG F(ab')2/Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 0.1ml
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236)/FITC 熒光標(biāo)記磷化S6核糖體蛋白抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
大豆源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒人補(bǔ)體片斷5b（C5b）elisa檢測(cè)試劑盒
人神經(jīng)肽Y受體Y5（NPYR5）elisa檢測(cè)試劑盒
人V-Myc骨髓瘤病癌基因同源物（MYC）elisa檢測(cè)試劑盒
人和肽（CPP）elisa檢測(cè)試劑盒
人C型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員E（CLEC4E）elisa檢測(cè)試劑盒
人VI型膠原α3（COL6α3）elisa檢測(cè)試劑盒
人Ⅰ型膠原α1（COL1α1）elisa檢測(cè)試劑盒
人cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB）elisa檢測(cè)試劑盒
人乳脫氫C（LDHC）elisa檢測(cè)試劑盒
人CXC趨化因子受體1（CXCR1）elisa檢測(cè)試劑盒
人補(bǔ)體因子H（CFH）elisa檢測(cè)試劑盒
人CXC趨化因子受體3（CXCR3）elisa檢測(cè)試劑盒
人補(bǔ)體成分3a（C3a）elisa檢測(cè)試劑盒
人伴刀豆球蛋白A（ConA）elisa檢測(cè)試劑盒
人肝臟膠原凝集1（CLL1）elisa檢測(cè)試劑盒
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值,。
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