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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P013372
產(chǎn)品規(guī)格： 50次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二,、操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，zui后在72℃ 保溫7min,。 3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。 4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服,、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,，不能混用,；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作,；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
2.為避免RNA降解,，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理,。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰,、陽性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時(shí)離心,。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放,。
6.為防止熒光干擾,，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記,。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置,；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,，淬滅基因選擇None,。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL,；空白孔不加。
4.除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
HDL ISA Kit 大鼠高密度脂蛋白Multi-class antibodies： 48T
Tanis/SELS(Selenoprotein S) 炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Chicken IgG/HRP 辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml
GABA(Mouse Gamma-aminobutyric acid) ELISA Kit 小鼠γ基丁 96T
NIMP NOGO相互作用線粒體蛋白1抗體 0.2ml
BrdU (A7) 溴脫氧尿苷單克隆抗體(增殖標(biāo)志物) 0.1ml
Tanis/SELS(Selenoprotein S) 炎癥負(fù)調(diào)控因子蛋白抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
tTG-IgA(Human tissue transglutaminase IgA) ELISA kit 人抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺抗體IgAMulti-class antibodies： 48T
IFN-Alpha 2b 干擾α2b抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh MAP3K2/MKK2 原活化蛋白激激2抗體 0.1ml
LDH(Human Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit 人乳脫氫 96T
RAD21 核基質(zhì)蛋白21抗體 0.2ml
C6orf50 6號(hào)染色體開放閱讀框50抗體 0.2ml
IFN-Alpha 2b 干擾α2b抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit MK IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1ml
GPAM 線粒體甘油3磷酰基轉(zhuǎn)移抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh ANKRD20A1 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白20A1抗體 0.2ml
Integrin AlphaV Beta5/FITC 熒光標(biāo)記整合αVβ5抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit human IgG F(ab')2/AP 性磷(AP)標(biāo)記的兔抗人IgG F(ab')2 0.1ml
SAMDC/AMD1/FITC 熒光標(biāo)記S-腺苷蛋脫羧抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒人GTP活化蛋白（GAP）elisa檢測試劑盒
人STAT蛋白抑制因子3（PIAS3）elisa檢測試劑盒
人心肌鈣黏蛋白（H-Cadherin）elisa檢測試劑盒
人Preptin 蛋白（Preptin）elisa檢測試劑盒
人β淀粉樣前體蛋白（βAPP）elisa檢測試劑盒
人β甘露糖苷（β Manase）elisa檢測試劑盒
人Hedgehog相互作用蛋白（HHIP）elisa檢測試劑盒
人原鈣黏γA2（PCDHγA2）elisa檢測試劑盒
人N端中段骨鈣（N-MID-OT）elisa檢測試劑盒
人ras同源物基因家族成員b（RHOB）elisa檢測試劑盒
人Salusin α蛋白（Salusin α）elisa檢測試劑盒
人蛋白活受體3（PAR3）elisa檢測試劑盒
人IgA Fc片段受體（FcaR）elisa檢測試劑盒
人P糖蛋白/滲透性糖蛋白（P-GP）elisa檢測試劑盒
人SH2攜帶蛋白（SHC/SLP-76）elisa檢測試劑盒
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