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詳細(xì)介紹
參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：熊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P013361
產(chǎn)品規(guī)格： 50次
產(chǎn)品分類：純化試劑盒
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
實(shí)驗(yàn)過程：
一,、試劑準(zhǔn)備 1. DNA模板 2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì),。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物） 3．10×PCR Buffer 4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP,、dGTP,、dTTP各2mM 5．Taq酶 | 二、操作步驟 1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1（10pM） 2μl 引物2（10PM） 2μl Taq酶（2U/μl） 1μl DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。 2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min,。 3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測(cè),。 |
注意事項(xiàng)
1.公司產(chǎn)品僅用于科研整個(gè)檢測(cè)過程應(yīng)嚴(yán)格按照本說明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作,，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服,、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用,，不能混用,；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭,；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作,；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置,。
2.為避免RNA降解，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè),；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰,、陽性對(duì)照,。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心,。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾,，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置,；不同批號(hào)試劑不能混用,。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None,。
9.實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無害化處理后方可丟棄,。
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL,；空白孔不加,。
4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6.每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
RBP ELISA Kit 大鼠視黃醇結(jié)合蛋白Multi-class antibodies： 48T
TBX18 轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Goat Bovine IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗IgG 0.1ml
U-TSH ELISA Kit 大鼠高靈敏度促甲狀腺 96T
Nanog 胚胎干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白抗體 0.1ml
BrdU 溴脫氧尿苷抗體 0.1ml
TBX18 轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
ALG(Human lymphocyte globulin) ELISA Kit 人抗細(xì)胞球蛋白Multi-class antibodies： 48T
IL-7Ra/CD127 白細(xì)胞介-7受體a抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Lpin1 protein Lpin1 抗體 0.2ml
8-OHdG(Human hydroxylysine) ELISA Kit 人8羥基脫氧鳥苷 96T
RAE1 mRNA結(jié)合蛋白抗體 0.2ml
C1QTNF9 補(bǔ)體C1qTNF9鏈多肽抗體 0.2ml
IL-7Ra/CD127 白細(xì)胞介-7受體a抗體Multi-class antibodies： 0.2ml
Rabbit Monkey IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗猴IgG 0.1ml
GIPR 胃泌抑制肽受體抗體 0.1ml
Rhesus antibody Rh ANGPTL6 血管生成相關(guān)蛋白6抗體 0.2ml
IRF-4/FITC 熒光標(biāo)記干擾調(diào)節(jié)因子4抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit horse IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml
SCP3/FITC 熒光標(biāo)記聯(lián)會(huì)復(fù)合體蛋白3抗體IgGMulti-class antibodies： 0.2ml
熊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒人低密度脂蛋白（LDL）elisa檢測(cè)試劑盒
人多巴受體D4（D4R/DRD4）elisa檢測(cè)試劑盒
人胰腺再生蛋白3γ（REG3γ）elisa檢測(cè)試劑盒
人組蛋白脫乙?；?/span>HDAC2）elisa檢測(cè)試劑盒
人球蛋白A （IgA）elisa檢測(cè)試劑盒
人絲蛋白23（PRSS23）elisa檢測(cè)試劑盒
人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6（LRP6）elisa檢測(cè)試劑盒
人骨保護(hù)配體（OPGL）elisa檢測(cè)試劑盒
人蛋白C-δ1（PKCδ1）elisa檢測(cè)試劑盒
人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白體9（LMP7/PSMB9）elisa檢測(cè)試劑盒
人谷脫氫（GDH/GLDH）elisa檢測(cè)試劑盒
人谷脫羧（GAD）elisa檢測(cè)試劑盒
人分泌型球蛋白A（sIgA）elisa檢測(cè)試劑盒
人多功能蛋白聚糖（VS）elisa檢測(cè)試劑盒
人多巴脫羧（DDC）elisa檢測(cè)試劑盒
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